Влияние сочетанного применения цитиколина и антител к глутамату на развитие острых генерализованных судорог, вызванных пентилентетразолом у мышей

Аннотация:

Цель исследования. На 2 моделях острых генерализованных судорог (ОГС), вызванных конвульсантом пентилентетразолом (ПТЗ), изучить эффективность сочетанного применения ноотропа цитиколина — препарата с противосудорожным действием, нейрорегенеративной, нейропротекторной активностью и антител (AT) к глутамату, обладающих противосудорожной активностью. Методика. Эксперименты выполнены на мышах-самцах линии С57В1/6 (п=87) массой 22—28 г. Эффективность сочетанного применения цитиколина и AT к глутамату изучали на двух моделях ОГС. Выполнено 2 серии экспериментов. В 1-й серии ОГС вызывали внутривенным введением 1% раствора ПТЗ со скоростью 0,01 мл/с. Для изучения эффективности сочетанного применения препаратов определяли минимальное противосудорожное действие цитиколина (Цераксон, «Nicomed Ferrer International, S.A.») и AT к глутамату при их внутрибрюшинном введении. С этой целью цитиколин вводили в дозах 500 и 300 мг/кг за 1 ч до введения ПТЗ, AT к глутамату — в дозах 5 и 2,5 мг/кг за 1 ч 30 мин до введения ПТЗ. AT к глутамату получали путем гипериммунизации кроликов соответствующим конъюгированным антигеном. Во 2-й серии ОГС вызывали подкожным введением ПТЗ в дозе 85 мг/кг. Для изучения эффективности сочетанного действия изучаемых препаратов последние вводили в минимально действующих дозах, установленных в 1-й серии экспериментов. Контролем во всех сериях опытов служили животные, которым вводили в аналогичных условиях и в том же объеме физиологический раствор. Результаты. Показано, что сочетанное применение цитиколина и AT к глутамату в минимально действующих дозах (300 и 2,5 мг/кг соответственно) при моделировании ОГС не вызывало повышения судорожной активности мозга и усиления противосудорожных свойств препаратов. Заключение. Сочетанное применение цитиколина и AT к глутамату в минимально действующих дозах не вызывало повышения судорожной активности мозга, что свидетельствует о безопасности совместного применения препаратов. Проведенное исследование может служить также экспериментальным обоснованием возможности использования сочетанного применения данных препаратов при судорогах с целью замедления прогрессирования нейродегенеративных процессов и благоприятного влияния на когнитивные функции. Ключевые слова: эпилепсия; судороги; цитиколин; антитела к глутамату; ноотропы. Введение. Отражением современных тенденций в эпилептологии является разработка новых подходов к лечению больных эпилепсией, позволяющих достичь более выраженного терапевтического эффекта, снижения дозы применяемых средств и снижение степени риска развития побочных эффектов. Используемые для купирования повышенной судорожной активности мозга антиэпилептические лекарственные средства вызывают ряд побочных эффектов, к числу которых можно отнести нарушение основных когнитивных функций (внимания, памяти, восприятия и др.), и превентивных защитных свойств в отношении развития нейродегенеративных процессов. Проблема предотвращения повреждений головного мозга при судорожном синдроме остается нерешенной. Одним из направлений терапии указанных нарушений является поиск и изучение механизма действия новых и уже имеющихся ноотропных лекарственных средств, обладающих поликомпонентным спектром фармакологических эффектов и многофакторным механизмом действия. Ноотроп цитиколин широко применяется в лечении когнитивных, чувствительных, двигательных неврологических нарушений дегенеративной и сосудистой этиологии. Ранее на модели ОГС нами было показано, что цитиколин оказывает противосудорожное действие и его сочетанное введение с антиэпилептическими препаратами — вальпроатом, а также с диазепамом в минимально действующих дозах, усиливает противосудорожные свойства обоих препаратов. Результаты этих исследований были защищены патентами. Противосудорожный эффект цитиколина связан с его нейропротективным и нейрорегенеративным действием. Экзогенно введенный цитиколин активирует механизмы защиты от действия повреждающих факторов, восстанавливая поврежденные цитоплазматические и митохондриальные мембраны нейронов, что способствует улучшению функционирования таких мембранных структур, как ионные насосы и рецепторы, без регуляции которых невозможно нормальное проведение нервных импульсов. Цитиколин предотвращает гибель клеток путём ингибирования механизмов включения апоптоза и подавления экспрессии проапоптозных белков, снижения интенсивности выброса возбуждающего нейротрансмиттера глутамата, что препятствует избыточному образованию свободных радикалов, сохранению метаболизма мозга и др. Согласно современным представлениям об эпилептогенезе, иммунным процессам отводится особая роль в дебюте заболевания, стадии его доклинического и клинического течения. Ранее нами было показано, что AT к глутамату при активной иммунизации и их системном (внутрибрюшинном и интраназальном) введении на разных моделях эпилептической активности оказывают выраженное противосудорожное действие. Цель исследования — изучение эффективности сочетанного применения ноотропа цитиколина — препарата с противосудорожным действием, нейрорегенеративной, нейропротекторной активностью и антител (AT) к глутамату, обладающих противосудорожной активностью на развитие острых генерализованных судорог (ОГС), вызванных конвульсантом пентилентетразолом (ПТЗ). Методика Эксперименты выполнены на мышах-самцах линии С57В1/6 (п=87) массой 22—28 г. Животных содержали в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и пищи. Все процедуры и эксперименты на животных проводили в соответствии с «Правилами лабораторной практики в Российской Федерации», утвержденными приказом Минздрава РФ № 267 от 19.06.2003 г. Эффективность сочетанного применения цитиколина и AT к глутамату изучали на 2 моделях ОГС. Проведено 2 серии экспериментов. В 1-й серии опытов ОГС вызывали внутривенным введением 1% раствора ПТЗ со скоростью 0,01 мл/с. Для изучения эффективности совместного применения препаратов определяли минимальное противосудорожное действие цитиколина (Цераксон, «Nicomed Ferrer Internacional, S.A.») и AT к глутамату при их внутрибрюшинном введении. AT к глутамату получали путем гипериммунизации кроликов соответствующим конъюгированным антигеном. С этой целью цитиколин вводили в дозах 500 и 300 мг/кг за 1 ч до ПТЗ, a AT к глутамату — в дозах 5 и 2,5 мг/кг за 1 ч 30 мин до введения ПТЗ. Определяли пороги клонических судорог и тонической фазы судорог с летальным исходом. Пороговую дозу ПТЗ, необходимую для наступления указанных судорог, вычисляли для каждого животного в мг/кг. Во 2-й серии опытов ОГС вызывали подкожным введением ПТЗ в дозе 85 мг/кг. Для изучения эффективности сочетанного применения препаратов, последние вводили в минимально действующих дозах, установленных в 1-й серии. На протяжении 30 мин визуально определяли латентные периоды первых судорожных проявлений, клонической и тонической фаз генерализованной судорожной реакции, длительность этих фаз, тяжесть судорожной реакции, продолжительность жизни и процент летальных исходов. Тяжесть судорожной реакции оценивали в баллах: 1 — миоклонические вздрагивания; 2 — клонические судороги передних конечностей; 3 — повторные клонические судороги; 4 — тонико-клонические судороги с падением животного на бок; 5 — повторные тонико-клонические судороги и/или гибель животного. Контролем во всех сериях опытов служили животные, которым вводили физиологический раствор том же объеме и в аналогичных условиях опыта. Статистическую обработку данных осуществляли по алгоритмам программы «IBM SPSS Statistic 20». Проводили предварительную проверку предположения о нормальном характере распределения эмпирических данных в каждой экспериментальной группе по тестам Колмогорова—Смирнова. Оценку значимости различий рассматриваемых выборок проводили по t-критерию Стьюдента. Частоту встречаемости признака оценивали с помощью точного метода Фишера. Для всех количественных признаков в сравниваемых группах производилась оценка среднеарифметических и стандартных ошибок среднего. Статистически значимыми считали различия между группами при р <0,05. Результаты и обсуждение: 1 серия. Дозы ПТЗ, необходимые для появления клонических судорог и тонической фазы судорог с летальным исходом у контрольных животных с введением физиологического раствора представлены в табл. 1. 1. Эффекты цитиколина. Введение цитиколина в дозе 500 мг/кг вызывало повышение на 27,50% судорожного порога, необходимого для появления клонических судорог, и на 25% — для развития тонической фазы судорог с летальным исходом по сравнению с группой контрольных животных с введением физиологического раствора, что свидетельствует противосудорожном действии препарата (табл. 1). Введение цитиколина в дозе 300 мг/кг вызывало менее значительное противосудорожное действие препарата, которое выражалось только в повышении на 22,40% порога, необходимого для развития тонической фазы судорог с летальным исходом. Порог клонической фазы судорог не отличался от такового по сравнению с контрольными животными с введением физиологического раствора. Таким образом, наименее выраженный противосудорожный эффект цитиколина наблюдали в дозе 300 мг/кг, которую и применяли в наших дальнейших исследованиях. 2. Эффекты AT к глутамату. Введение AT к глутамату в дозе 5 мг/кг вызывало повышение на 43,21% судорожного порога, необходимого для появления клонических судорог, и на 45,58% — для развития тонической фазы судорог с летальным исходом по сравнению с группой контрольных животных с введением физиологического раствора, что свидетельствует противосудорожном действии препарата (табл. 1). Введение AT к глутамату в дозе 2,5 мг/кг вызывало менее значительное противосудорожное действие препарата, которое выражалось только в повышении на 10,89% порога, необходимого для развития клонических судорог. Порог тонической фазы судорог с летальным исходом не отличался от такового по сравнению с контрольными животными с введением физиологического раствора. 3. Эффекты сочетанного применения AT к глутамату и цитиколина в минимально действующих дозах Сочетанное применение цитиколина и AT к глутамату в минимально действующих дозах — 300 и 2,5 мг/кг соответственно — приводило к повышению судорожного порога, необходимого для появления клонических судорог на 21,06% и не влияло на тоническую фазу судорог. Таким образом, сочетанное применение препаратов не вызывало повышения судорожной активности мозга. 2 серия. Во 2-й серии для изучения эффективности сочетанного применения цитиколина и AT к глутамату использовали минимально действующие дозы, подобранные в 1-й серии экспериментов. У контрольных животных подкожное введение ПТЗ приводило к развитию генерализованной эпилептической активности: через 160—180 с появлялись первые судорожные проявления в виде вздрагивания головы или отдельных мышц туловища, которые через 300—370 с переходили в клонические судороги (табл. 2). Завершались судороги тонико-клоническим припадком с падением животного на бок и фазой постприступной депрессии. Тяжесть судорог у животных составила 5 баллов, а летальность — 100%. Как следует из табл. 2, совместное применение цитиколина и AT к глутамату в минимально действующих дозах — 300 и 2,5 мг/кг соответственно, на модели ОГС, вызванных подкожным введением ПТЗ у мышей С57В1/6, приводило к увеличению латентного периода появления тонической фазы судорог с летальным исходом и не вызывало повышения судорожной активности мозга. Таким образом, в результате исследования установлено, что совместное применение цитиколина, обладающего нейрорегенеративной и нейропротекторной активностью, а также противосудорожным действием, и AT к глутамату, обладающих противосудорожной активностью, в минимально действующих дозах на двух моделях ОГС не вызывало повышения судорожной активности мозга, что свидетельствует о безопасности сочетанного применения препаратов. Кроме того, проведенное исследование может служить экспериментальным обоснованием сочетанного применения препаратов при судорогах с целью благоприятного влияния на когнитивные функции и замедления прогрессирования нейродегенеративных процессов.

Авторы:

Издание: Патологическая физиология и экспериментальная терапия
Год издания: 2018
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2018.-N 2.-С.24-29. Библ. 21 назв.
Просмотров: 42