Роль полиморфного варианта G-105A гена SEPS1 в инициации преждевременных родов

Аннотация:

Причины спонтанных преждевременных родов до конца не изучены. К факторам риска спонтанных преждевременных родов относятся: акушерско-гинекологический анамнез, осложнения текущей беременности, наличие инфекционных осложнений, генетическая предрасположенность, социальные причины, сопутствующие заболевания. Одним из таких факторов риска может быть полиморфный вариант G-105A гена селенопротеина S (SEPS1), который может рассматриваться как претендент на роль нового маркера воспаления. Цель исследования — изучение ассоциации полиморфного варианта G-105A гена SEPS1 с риском преждевременных родов у женщин европейской популяции в городе Москве. Методы. В исследование включены 33 женщины с преждевременными родами на сроках от 23,5 до 37 недель беременности и 29 женщин с доношенной беременностью (контрольная группа). Исследование проводилось после получения информированного согласия от пациентов. Генотипирование полиморфного варианта G-105A гена SEPS1 осуществляли методом ПЦР-ПДРФ анализа. Результаты. В проведенном исследовании было показано, что частота встречаемости аллеля А полиморфного варианта G-105A гена SEPS1 2.0 раза выше у женщин с преждевременными родами чем в контрольной группе. Впервые выявлены статистически значимые различия в частотах генотипов полиморфного варианта G-105A гена SEPS1 между контрольной и исследуемой группами (хи2=3.921, р=0.0477 и по критерию Z(t=2.07, р=0.0431)). Выводы. В случае подтверждения полученных результатов полиморфный вариант гена G-105A SEPS1 может быть использован для скрининга высокого риска преждевременных родов у женщин на ранних сроках беременности. Ключевые слова: преждевременные роды, спонтанные преждевременные роды, воспаление, генетические маркеры. Введение. По данным ВОЗ (2014 г.), ежегодно рождается порядка 15 миллионов недоношенных детей. Преждевременными считаются роды, наступившие в сроки беременности от 22 до 37 недель. С преждевременными родами (ПР) связано порядка 75% случаев перинатальной смертности. Причины спонтанных преждевременных родов (СПР) до конца не изучены. К факторам риска СПР относятся: акушерско-гинекологический анамнез (гинекологические заболевания, исходы предыдущих беременностей и родов), осложнения текущей беременности, гестозы, многоплодие, многоводие, предлежание плаценты), социальные причины (возраст, вредные привычки, условия жизни), сопутствующие заболевания (пороки сердца, заболевания почек, острые инфекционные заболевания). Частота ПР в разных странах составляет 5-—12%. По данным разных авторов порядка 40% СПР обусловлено наличием инфекции. У 80% детей, родившихся в срок до 30-й недели беременности, диагностируется гистологически верифицированный хориоамнионит. Воспалительные процессы играют значимую роль в развитии многих заболеваний. К настоящему времени идентифицировано достаточно большое количество генов, продукты которых могут считаться маркерами воспаления, либо которые напрямую связаны с реализацией инфекционных процессов в организме. Таким образом, известно более 200 цитокинов (интерлейкины (IL), факторы некроза опухолей (TNF-а), интерфероны, факторы роста), также маркерами воспаления являются С-реактивный белок, трансформирующий ростовой фактор (TGF-бета) и многие другие. Активное изучение полиморфных вариантов генов интерлейкинов позволило установить взаимосвязь между различными аллельными вариантами этих генов с развитием ПР, развитием астмы, онкологических заболеваний, вирусного гепатита, ревматоидного артрита и многих других заболеваний. В настоящее время накоплено большое количество данных о роли воспаления в развитии преждевременных родов. Так, например, выявлена корреляция полиморфизма генов IL-1бета, толл-подобных рецепторов (TLR) с невынашиванием беременности и преждевременными родами. В человеческом организме существует особый класс белков — селенопротеины, один из которых, SEPS1 может рассматриваться как претендент на роль нового маркера воспаления. Белки селенопротеины содержат один или несколько остатков селеносодержащей аминокислоты селеноцистеина и выполняют разнообразные функции. Так, селенопротеин Р входит в состав плазмы крови и отвечает за безопасный транспорт химически активного селена по организму, а глутатионпероксидазы защищают ткани организма от окислительного повреждения и представляют собой селеносодержащие гликопротеины. В семействе селенопротеинов особым нестандартным протеином является селенопротеин S. Он оказывает влияние на иммунные и воспалительные сигнальные пути. Селенопротеин S может быть классифицирован как новый мембранный протеин предотвращающий стрессовый ответ на активацию воспалительного каскада. В гене SEPS1 обнаружено несколько полиморфизмов, на настоящий момент практически не изученных. Для полиморфного варианта G-105A (rs28665122) гена SEPS1 показана корреляции с риском возникновения преждевременных родов у женщин в китайской популяции, риском развития рака желудка у японцев и китайцев, риском развития рака легких у норвежцев. В то же время есть данные, что в зависимости от этнической принадлежности и различного влияния экологии генетические проявления могут различаться. Поскольку исследования полиморфного варианта G-105A (rs28665122) гена SEPS1 в Российской Федерации не проводились, представляется весьма актуальным изучение ассоциации данного полиморфного варианта гена с преждевременными родами в московской популяции. Методика. Исследование проводилось с соблюдением принципов добровольности и конфиденциальности в соответствии с «Основами законодательства РФ об охране здоровья граждан» (Указ Президента РФ от 24.12.93 № 2288). В данное исследование были включены 33 женщины с преждевременными родами на сроках от 23.5 до 37 недель беременности. В качестве контрольной группы выступали 29 женщин с доношенной беременностью. Исследование проводилось при получении письменного информированного согласия пациентов. Кровь для исследования забирали у пациенток родильных домов №29 и №8. Кровь собирали в пробирки с EDTA и хранили при температуре — 20°С. ДНК выделяли из лейкоцитов крови наборами «ДНК-экспресс-кровь» производства ООО «Синтол». Для анализа полиморфного варианта С-105 А (rs28665122) гена SEPS1 использовался метод определения полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ-анализ, RFLP-restriction fragment length polymorphism). Реакцию ПЦР проводили в 25 мкл реакционной смеси содержащей 20 нг ДНК, 0.2 мкм каждого праймера, 0.2 мМ дезоксинуклеозидтрифосфата и 0.5 ед Tag-полимеразы в 1х буфере (ООО «Синтол»). Амплификацию проводили по программе: 95°С — 2 мин; 35 циклов (94°С — 30 с; 57°С — 30 с; 72°С — 30 с И 72°С — 7 мин). ПЦР проводили на амплификаторе Терцик (ДНК-технология, Россия). В работе были использованы следующие праймеры: прямой 5'-TCCTTGGCTTCAGTGTCCAAT-3' и обратный 5'-CGCGGACAGAGACTCCTCTT-3'. Обязательно ставили негативный контроль, содержащий вместо матрицы деионизованную воду. Далее амплифицированный фрагмент ДНК длиной 370 н.п. подвергали обработке эндонуклеазой Мох20 I (НПО «Сибэнзим»). Расщепление ДНК проводили в объеме 20 мкл в рекомендованном производителем буфере и соответствующей температуре в течение 1,5 часов. Проверка полноты расщепления ДНК рестриктазами осуществлялась путём расщепления 1 мкг фага лямбда за 1 час. Для продукта амплификации использовали трехкратное количество фермента. Фрагменты ДНК после рестрикции разделяли в 3% агарозном геле с бромистым этидием. Электрофорез проводили в горизонтальной камере с использованием в качестве электродного буфера 1xTAE при напряженности поля 10 В/см. По окончании электрофореза гель просматривали в ультрафиолетовом свете при длине волны 254 нм. У носителей аллеля С фрагмент ДНК гена SEPS1 имеет размер 370 п.н., в то время как у носителей аллеля А фрагмент ДНК имеет размер 233 и 137 н.п. У носителей гетерозиготного генотипа выявляются все три фрагмента. Математическую обработку результатов проводили с использованием закона генетического равновесия Харди—Вайнберга для аутосомных признаков. При сравнении частот встречаемости генотипов применяли критерий Пирсона. Комплексную оценку взаимосвязей между исследуемыми генотипами и риском заболевания проводили с помощью логистической регрессии, определяя отношение шансов (OR) и 95% доверительный интервал (СI95%), значение р<0,05. Анализ с использованием Z-критерия (аналог критерия Стьюдента для долей) проводили в системе для статистического анализа данных Statistica 6.1 RUS. Работа выполняется на базе межкафедральной лаборатории молекулярных методов исследования Медицинского института РУДН. Выделение ДНК проводится на базе ЦКП НОЦ РУДН. Результаты и обсуждение: Популяционная частота аллелей гена SEPS1 в разных популяциях изучена недостаточно. По данным Yan Wang с соавт. среднепопуляционная частота аллеля А гена в китайской популяции составляет 6%. Частота гетерозигот СА полиморфного варианта G-105A гена SEPS1 в данной популяции составляет 11,1%, частота гомозигот АА — 0,2%. Нами получены предварительные данные, согласно которым, популяционная частота аллеля А среди европейской популяции в городе Москве составляет 12%, что значительно превышает частоту встречаемости данного аллеля в китайской популяции, что согласуется с данными из базы 1000 genomes (http://www.1000genomes.org/). По предварительным данным, в группе женщин с преждевременными родами частота встречаемости аллеля А полиморфного варианта G-105A гена SEPS1 статистически значимо выше, чем в контрольной группе (24,2% против 12.1%, р<0,05). Распределение частот генотипов полиморфного варианта G-105A гена SEPS1 в контрольной группе и группе пациенток с недоношенной беременностью (таблица) соответствует аддитивной модели наследования (тест Кохрана—Армитаджа для линейных трендов). Следует подчеркнуть, что наличие даже одного аллеля А полиморфного варианта С-105А гена SEPS1 может провоцировать преждевременные роды (доминантная модель наследования: GG против (AG+AA), OR = 2,96, С195% = (0,99 — 8,8)). Выводы: Таким образом, исследование полиморфного варианта G-105A гена SEPS1 при угрозе возникновения преждевременных родов может быть использовано как один из скрининговых методов диагностики риска реализации ПР.

Авторы:

Издание: Патологическая физиология и экспериментальная терапия
Год издания: 2018
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2018.-N 2.-С.77-81. Библ. 12 назв.
Просмотров: 51