Дальневосточный государственный медицинский университет Поиск | Личный кабинет | Авторизация
Поиск статьи по названию
Поиск книги по названию
Каталог рубрик
в коллекциюДобавить в коллекцию

Микробиологические особенности хирургической инфекции мягких тканей


Аннотация:

Изучена микрофлора очагов хирургической инфекции мягких тканей (абсцессы, флегмоны) у 112 больных. Исследованы свойства 127 штаммов, выделенных из патологического материала. Выявлено, что среди возбудителей острых и хронических гнойно-воспалительных процессов мягких тканей преобладал Staphylococcus aureus. При хронических хирургических инфекциях раневая микрофлора носит полимикробный характер с включением в патологический процесс грамотрицательной микрофлоры. Штаммы золотистого стафилококка, энтерококки, синегнойная палочка достоверно более устойчивы к фагоцитозу при хроническом гнойно-воспалительном характере заболевания. Персистентный потенциал микроорганизмов (антилизоцимная, антиинтерфероновап, антикомплементарная, каталазная активность) играет значительную роль при затяжном хроническом течении гнойно-воспалительных процессов. Не всегда эффективные, а зачастую и неудовлетворительные результаты лечения больных с тяжелыми формами инфекционных заболеваний должны привести к изменению рутинного клинико-микробиологического подхода и учету персистентного потенциала возбудителей. В настоящее время актуальной проблемой является осложненное течение многих инфекционных заболеваний. Характерен не только высокий процент бактериальных инфекций в структуре инфекционной патологии, но и все возрастающее число пациентов с атипично протекающими заболеваниями и развитием осложнений. Больные с гнойно-воспалительными заболеваниями (ГВЗ) мягких тканей составляют от 50 до 80% коечного фонда специализированных хирургических стационаров как в Российской Федерации, так и за рубежом. Многочисленные попытки разработки новых групп антибактериальных химиотерапевтических средств несомненно привели к определенным успехам. Но эффект каждой новой группы препаратов является временным, не окупает финансовые затраты и приводит к новому витку генетической изменчивости микроорганизмов. Известно, что развитию осложнений и последующей хронизации инфекционного заболевания способствует наличие у микроба защитных ферментов и структур. Особенности развития и течения гнойной инфекции являются результатом взаимодействия между болезнетворным микроорганизмом и восприимчивым макроорганизмом и в значительной степени зависят от того, какого состава и характера микст-инфекция вызвала заболевание. В медицинской практике необходимы результаты объективных бактериальных тестов для прогнозирования течения ГВЗ, оценки степени опасности развития инфекционных осложнений. Изучение патогенетически значимых свойств микроорганизмов, направленных на инактивацию эффекторов противоинфекционного иммунитета и тем самым нарушающих процесс элиминации патогена из очага воспаления, может стать альтернативным подходом к прогнозированию длительности течения ГВЗ и дать возможность своевременного подключения иммунокорригирующих препаратов. Цель настоящего исследования - изучение микрофлоры и факторов персистенции возбудителей острых и хронических хирургических инфекций мягких тканей. Материалы и методы. Исследовано 127 факультативно-анаэробных штаммов, выделенных из патологического материала (раневое отделяемое) от 2 групп пациентов. Первая группа пациентов (65 человек: 34 мужчины, 31 женщина в возрасте от 22 до 58 лет) проходила стационарное лечение в отделении челюстно-лицевой хирургии Республиканской клинической больницы г. Нальчика по поводу острого неодонтогенного абсцесса челюстно-лицевой области. Вторая группа больных - с хроническими ГВЗ мягких тканей челюстно-лицевой области в стадии обострения (47 человек: 23 мужчины, 24 женщины в возрасте от 19 до 52 лет). Бактериологическое исследование проводили общепринятыми методами. Выделенные штаммы бактерий хранили в пробирках с полужидким агаром при 6°С с пересеиванием каждый месяц. Для работы использовали суспензии бактерий в 0,9% растворе NaCl с оптической плотностью А510 0,2, что соответствует концентрации 1,5х109 кл/мл. Антилизоцимная активность (АЛА) бактерий изучалась по методу О.В.Бухарина. К 1,5% питательному агару добавляли лизоцим в разведении с 1 до 7 мкг/мл и разливали в чашки Петри. После застывания и подсушивания на поверхность среды наносили суточную культуру исследуемого штамма. Чашки инкубировали 24 ч при 37°С. Выросшие колонии убивали парами хлороформа (20-25 мин), а затем на поверхность заливали слой питательного агара (3-4 мл) с 0,2 мл 1 млн взвеси суточной агаровой культуры Micrococcus lutens var. lysodeiticus N2665 и инкубировали 24 ч при 37°С. Учет опыта проводился по наличию роста М. lutens. Тест-культура вырастает вокруг колоний тех штаммов, которые нейтрализуют внесенный в среду лизоцим. Для оценки уровня АЛА были приняты следующие критерии: низкий уровень АЛА - 1-2 мкг/мл, средний - 3-5 мкг/мл, высокий - свыше 5 мкг/мл. Антиинтерфероновая активность (АИА) бактерий изучалась по методу О.В.Бухарина. К 1,5% питательному агару добавляли препарат Интерцид (Россия), представляющий собой антибактериальную составляющую интерферона в разведении 1/60-1/40, и разливали в чашки Петри. После застывания и подсушивания на поверхность среды наносили суточную культуру исследуемого штамма. Чашки инкубировали 24 ч при 37°С. Выросшие колонии убивали парами хлороформа (20-25 мин), а затем на поверхность заливали слой питательного агара (3-4 мл) с 0,2 мл 1 млн взвеси суточной агаровой культуры Corynebacterium xerosis 181 и инкубировали 24 ч при 37°С. Учет опыта проводился по наличию роста С. xerosis 181. Тест-культура вырастала вокруг колоний тех штаммов, которые нейтрализуют внесенный в среду интерферон. Для исследования антикомплементарной активности (АКА) бактерий на поверхность 1,5% питательного агара наносили суточную культуру исследуемого штамма. Чашки инкубировали 24 ч при 37°С. Выросшие колонии убивали парами хлороформа (20-25 мин), а затем на поверхность заливали слой питательного агара (3-4 мл) с добавлением комплемента (50, 25 и 12,5 ед/мл). Чашки инкубировали 24 ч. Затем чашки заливали третьим слоем, содержащим 0,1 мл 1 млн взвеси суточной агаровой культуры Escherichia coli 212 и инкубировали 24 ч при 37°С. Учет опыта проводился по наличию роста Е. coli 212. Тест-культура вырастала вокруг колоний тех штаммов, которые нейтрализуют внесенный в среду комплемент. Активность каталазы штаммов Staphylococcus aureus определяли йодометрическим методом. Для этого к 0,2 мл взвеси S. aureus, стандартизованной до оптической плотности 0,2 у.е., добавляли 1 мл свежеприготовленного 0,0125 М раствора Н202 и инкубировали 10 мин при комнатной температуре. Реакцию разложения Н202 каталазой бактерий останавливали добавлением 20 мкл 2 Н раствора НС1. Затем добавляли 0,5 мл свежеприготовленного 0,025 М раствора KI, тщательно перемешивали и осаждали клетки S. aureus центрифугированием в течение 15 мин при 3000 g, после чего измеряли оптическую плотность не позднее чем через 10 мин после центрифугирования. Активность каталазы бактерий оценивали по калибровочной кривой, полученной с использованием коммерческого препарата каталазы (Sigma, США). Оценку эффективности внутриклеточного киллинга оценивали по методу S.Nilsen [10]. После постановки фагоцитарной реакции (см. выше) взвесь центрифугировали 10 мин при 1500 g, отбирали осадок, добавляли трехкратный объем Н20 и производили высев по методу Гольда на чашку Петри с мясо-пептонным агаром. Число выживших после фагоцитоза бактерий определяли по количеству колоний в секторах через 24 ч. При математической обработке результатов исследований были использованы расчет средних значений и доверительный интервал, рассчитанные по данным п-измерений. Доверительный интервал оценивали с использованием критерия Стъюдента для р<0,05. Статистическую обработку и расчет корреляционного коэффициента проводили с использованием программы Microsoft Excel. Результаты и обсуждение При исследовании микрофлоры при острых и хронических хирургических инфекциях мягких тканей лица и шеи обнаружено, что основными возбудителями этих инфекций являлись грамположительные микроорганизмы (табл. 1). Возбудители острых гнойных заболеваний у 83% обследованных больных представлены в виде монокультур, среди которых лидирует золотистый стафилококк - 76,0% (см. табл. 1). Совершенно иная картина выявлена при бактериологическом исследовании гнойных ран у больных, оперированных по поводу хронической хирургической инфекции (см. табл. 1). Наряду со стафилококками возбудителями хронических гнойно-воспалительных процессов являются грамотрицательные микробы. Раневая микрофлора в этих случаях носит полимикробный характер и в 57% представлена в микробных ассоциациях. Преобладают ассоциации S. aureus и Enterococcus faceum. Достоверно увеличивается количество штаммов Pseudomonas aeruginosa, Е. faceum, Streptococcus pyogenes. Подобные микробные ассоциации отличаются поддерживающим характером взаимодействий, способствующим дальнейшей хронизации гнойного очага. Приведенные в литературе данные свидетельствуют о сложностях традиционной антибиотикотерапии и возрастающей способности микроорганизмов вырабатывать устойчивость к антибиотикам. Однако микроорганизмы приспособились и к инактивации факторов естественной защиты макроорганизма, к которым относятся выработка активных форм кислорода, лизоцима, комплемента, цитокинов и др. Образование антилизоцимного фактора в совокупности со способностью к инактивации антибактериального компонента интерферона ответственно за резистентность бактерий к кислороднезависимому бактерицидному действию нейтрофилов. Действительно, все выделенные штаммы бактерий обладали подобными факторами защиты (табл. 2). Обращают на себя внимание достоверно более выраженные персистентные характеристики штаммов S. aureus, Staphylococcus epidermidis и Е. faceum - возбудителей хронических гнойных инфекций, благодаря которым бактерии защищаются от бактерицидного действия сыворотки крови и колонизируют в органах и тканях. С другой стороны, высокая АИА является причиной снижения эффективности иммунокорригирующей терапии. Многие из препаратов-иммуностимуляторов, применяемых в настоящее время в клинике, являются активаторами клеток видового иммунитета, продуцирующих интерфероны, или содержат готовые молекулы цитокинов. Высокая сопротивляемость бактериальных штаммов, выявленная на данном этапе, объясняет не всегда удовлетворительный эффект иммунотерапии при хронических инфекциях. АКА выявлена только у штаммов золотистого стафилококка: у 30,7% изученных штаммов S. aureus возбудителей острых ГВЗ и в 36,2% - при хронических одонтогенных инфекциях мягких тканей. С другой стороны, устойчивость микроорганизмов к нейтрофильному киллингу обусловлена способностью некоторых штаммов к инактивации активных форм кислорода. Каталаза - это фермент из группы гидропероксидаз, катализирующий окислительно-восстановительную реакцию, в ходе которой из двух молекул перекиси водорода образуются вода и кислород. Доказано, что существует прямая корреляционная связь между активностью стафилококковой каталазы и выживаемостью бактерий в ходе фагоцитоза. Стафилококковая каталаза играет важную роль и в межмикробных взаимодействиях, процессе формирования микробных биоценозов. Обнаружено, что наиболее защищены от кислородзависимых бактерицидных факторов нейтрофилов стафилококки, они обладают каталазной активностью: 2,4 мкл/мл при острых процессах и 4,9 мкл/мл - при хронических. При исследовании эффективности внутриклеточного киллинга лейкоцитами доноров процент выживших S. aureus составлял 25,0±5,0%, S. epidermidis - 13,5±5,0%, S. pyogenes - 12,5±2,5, E.faecium - 12,0±3,0%, P. aeruginosa 4,5±2,0% (табл. 3). Штаммы золотистого стафилококка, энтерококки, синегнойная палочка достоверно более устойчивы к фагоцитозу при хроническом гнойно-воспалительном характере заболевания (см. табл. 3). Анализ полученных данных позволил нам выявить связь между наличием у возбудителей хирургической инфекции факторов персистенции и длительностью течения воспалительного процесса. Все персистентные характеристики сильнее выражены у возбудителей хронических гнойно-воспалительных процессов. Кроме того, повышение защитных свойств возбудителей позволяет им длительно пребывать в первичном очаге и распространяться за его пределы. Не всегда эффективные, а зачастую и неудовлетворительные результаты лечения больных с тяжелыми формами инфекционных заболеваний должны привести к изменению рутинного клинико-микробиологического подхода и учету персистентного потенциала возбудителей. Прогнозирование инфекционно-воспалительных осложнений возможно при выработке быстрой эффективной схемы изучения факторов персистенции, при обнаружении которых клиницистам следует обратить внимание на возможность подключения современных иммуностимуляторов и бактерицидных препаратов неантибиотического происхождения.

Авторы:

Хараева З.Ф.
Камбачокова З.А.
Шорова Д.Х.

Издание: Consilium medicum. Хирургия
Год издания: 2018
Объем: 4с.
Дополнительная информация: 2018.-N 1.-С.27-30. Библ. 16 назв.
Просмотров: 104

Рубрики
Ключевые слова
aeruginosa
aureus
corynebacterium
enterococcus
escherichia
faecium
pseudomonas
pyogenes
staphylococcus
streptococcus
абсцесс
агаровом
агаровый
активатор
активность
альтернативная
анализ
антибактериальные
антибиотик
антибиотикотерапия
антиинтерфероны
антикомплементарная
антилизоцимная
ассоциации
атипичная
бактериального
бактерии
бактериология
биоценоз
болезнетворный
болеющие
больница
больные
быстрый
взаимодействие
взвесь
видовая
включениями
внимание
внутриклеточные
вода
водород
возбудители
возможности
возраст
воспаление
воспалительные
восприимчивость
временных
время
второй
выделение
выживаемости
выживаемость
высокий
выявленный
генетическ
гидропероксид
гнойн
готовность
грамотрицательные
грамположительные
групп
дальний
данные
данных
действие
длительная
длительность
добавки
доверительные
донор
другому
естественная
женщин
заболевания
залива
затрата
затяжные
защита
защитная
значению
золотистый
игровая
изменение
изменчивость
изучение
изучению
иммунитет
иммунокорригирующий
иммуностимуляторы
иммунотерапия
инактивация
интервал
интерферон
интерцид
инфекцией
инфекции
инфекционная
инфекция
использование
использованием
исследование
исследований
исследования
калибра
картина
каталаза
катализирующая
кислород
кислородзависимая
кислородный
клетки
клеток
клиники
клиническая
клиническое
ключ
коечного
количество
колоний
коммерческие
комнатные
комплемент
компонент
концентрация
корреляция
коэффициент
кривая
критерии
крови
культур
лейкоцитов
лет
лечение
лизоцим
литература
лица
макроорганизм
математическая
материал
медицинская
метод
микроб
микробиологические
микробная
микроорганизмов
микроорганизмы
микрофлора
микстинфекция
молекула
моно
мужчин
мягкая
мягких
наличия
нальчик
направленный
настоящие
нейтрофиллы
нейтрофильные
неодонтогенные
неудовлетворительный
низкие
новые
областей
обнаружение
обострение
обработка
образ
образование
обследования
общепринятые
объективная
объем
одного
одонтогенная
окислительного
опасности
оперированный
определенного
оптическая
орган
оса
осадок
осложнение
осложненный
основной
особенности
острая
ответ
отдел
отделение
оценка
очага
очаговая
палочка
параметры
патоген
патогенетическая
патологии
патологическая
пациент
первая
первичная
перекиси
персистенции
петр
питательная
плотности
поверхности
повышение
поддерживающая
подобные
подход
поза
поздние
пола
полужидкая
попытки
после
послед
потенциал
практика
препараты
принятия
причина
пробирка
проблема
прогнозирование
программ
происхождения
протек
противоинфекционная
проход
процесс
прямая
работа
разведения
развитие
разработка
раневая
раствор
расчет
реакцией
резистентность
результата
республика
роль
россии
российская
роста
рубежом
рутин
свежего
свидетельства
своевременная
свойства
связей
сектор
силлард
синегнойная
след
слова
сложные
слой
случаев
снижение
совокупность
современная
содержащая
сопротивляемость
состав
специализированная
способ
способности
среда
среднего
средств
стадии
стандартизованный
статистические
статьи
стафилококк
стафилококковая
стационар
стационарная
степени
структур
стъюдента
суспензии
суточное
схема
сша
сыворотка
температура
терапия
тестовые
течения
тканей
ткань
традиционная
третья
тяжелая
уровень
уровни
успехе
устойчивое
устойчивости
учет
фагоцитарная
фагоцитоз
фактор
факультативные
федерации
фермент
финансовое
флегмона
фонды
форм
формирование
характер
характеристика
химиотерапевтический
хирургическая
хирургически
хирургия
хлороформ
хроническая
хронически
хронической
цель
центр
центрифугирование
цитокинового
чашки
человек
челюсти
число
шеи
штамм
штаммы
элиминации
энтерококк
этап
эффект
эффективность
эффективный
эффекторы
Ваш уровень доступа: Посетитель (IP-адрес: 44.220.251.236)
Яндекс.Метрика