РАЦИОНАЛЬНЫЙ ПОДХОД К ПОЛУЧЕНИЮ ВЫСОКОСПЕЦИФИЧНЫХ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ПРОТИВ РЕКОМБИНАНТНОГО АЛЬФА-СИНУКЛЕИНА

Аннотация:

Предложена совокупность приемов для быстрого и простого получения поликлональных антител к целевому антигену - альфа-синуклеину. Для очистки специфических поликлональных антител кролика против рекомбинантного альфа-синуклеина человека, наработанных в результате подкожной иммунизации с полным адъювантом Фрейнда, были использованы два метода. Показано, что очистка на CNBr-активированной сефарозе с иммобилизованным альфа-синуклеином приводит к получению препарата антител, содержащего в качестве примеси обогащенный гистидиновыми остатками гликопротеин крови кролика (histidine-rich glycoprotein). Двухстадийная очистка специфических антител на сефарозе с иммобилизованным белком G, а затем на колонке с иммобилизованным альфа-синуклеином позволяет избавиться от примесного белка и получить гомогенный препарат антител. Полученные антитела узнают различные конформации альфа-синуклеина и могут быть использованы для всех видов иммунного анализа, включая иммуноцитохимический. ВВЕДЕНИЕ. Использование коммерчески доступных поликлональных и моноклональных антител облегчает проведение экспериментальных исследований, но имеет определенные ограничения. Основное ограничение заключается в том, что, как для иммунизации животных, так и для последующей иммуноаффинной очистки антител, как правило, используют не полноразмерные белки-антигены, а синтетические пептиды, гомологичные определённым участкам аминокислотной последовательности целевого белка. Особенно часто такие пептиды используют при индивидуальном заказе антител к определенному белку. С одной стороны, для таких антител заранее известно, с какими эпитопами белка-антигена они будут взаимодействовать. Но с другой стороны, часто именно этот тип антител даёт перекрестную реакцию с белками, обладающими сходными эпитопами, а также не позволяет отличить друг от друга изоформы исследуемого белка. Например, поликлональные антитела к альфа-синуклеину фирмы "Cell Signaling Technology" (США) получают путём иммунизации животных синтетическим пептидом, соответствующим С-концевому фрагменту альфа-синуклеина человека, затем проводят двухступенчатую очистку сначала на иммобилизованном белке А, а потом на иммобилизованном пептиде. Однако даже после такой очистки антитела, во-первых, дают перекрёстную реакцию с альфа- и бета-изоформами альфа-синуклеина, и, во-вторых, выявляют в экстрактах тканей не только альфа-синуклеин, но и ещё неизвестный белок с молекулярной массой около 28 кДа

Авторы:

Издание: Биомедицинская химия
Год издания: 2018
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2018.-N 3.-С.276-282. Библ. 12 назв.
Просмотров: 28