Экспрессия и характеристика фитазы из Obesumbacterium proteus в дрожжах Pichia pastoris

Аннотация:

Для увеличения уровня экспрессии рекомбинантных фитаз в дрожжах Pichia pastoris была разработана оптимизированная по кодоновому составу синтетическая последовательность гена phyOp-mod, кодирующая фитазу из Obesumbacterium proteus. Содержание нуклеотидов G и С было скорректировано до 48,33%, АТ-богатые участки устранены. Для очищенного фермента были определены основные характеристики. Оптимальными для работы фитазы PhyOp являются значения: рН 4,0 и температура 50°С. Значения удельной активности, константы Михаэлиса (Km) и максимальной скорости реакции (Vmax) в отношении фитата натрия составили 1452 ед/мг, 0,31 мМ и 823 ед/мг, соответственно. Показано, что оптимизация кодонового состава гена phyOp-mod привела к увеличению экспрессии целевого фермента. Благодаря относительно высокой удельной активности и кинетическим характеристикам рекомбинантная фитаза, обозначенная как PhyOp, потенциально пригодна для применения ее в качестве кормовой добавки. Фосфор является важным минеральным питательным веществом для роста и развития животных. В большинстве источников сырья, используемого в животноводстве, такого как зерновые и бобовые, фитат (мио-инозитол гексакисфосфат) является основной формой хранения фосфора. Однако такие животные, как свиньи, бройлеры, индейки не способны усваивать фитатный фосфор из-за отсутствия необходимого фермента в пищеварительном тракте. Фитаты являются хелатирующими агентами и препятствуют эффективному усвоению кальция, магния, цинка, железа и других минеральных веществ, а также связывают белки в недоступные для переваривания комплексы.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2018
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2018.-N 4.-С.18-25. Библ. 35 назв.
Просмотров: 33