ШАПЕРОН-ЗАВИСИМАЯ ОПТИМИЗАЦИЯ ЭКСПРЕССИИ В КЛЕТКАХ E.COLI И ОЧИСТКА РЕКОМБИНАНТНОЙ РАСТВОРИМОЙ ЛИПИД А ФОСФАТАЗЫ LPXE FRA N CIS ELLA TULARENSIS

Аннотация:

Липид-1 а-фосфатазы LpxE отщепляют фосфатную группу в первом положении липида А липополисахарида грамотрицательных бактерий, что снижает токсичность и реактогенность бактериального эндотоксина при сохранении его иммуногенности. Обработка данными ферментами препаратов рекомбинантных белков, полученных в бактериальных продуцентах, например, в E.coli, может найти применение в технологиях очистки различных фармацевтических субстанций, в первую очередь, различных белковых компонентов вакцин. Данная работа посвящена созданию эффективного метода получения растворимого белка LpxE F. tularensis в гетерологичной системе экспрессии на базе E.coli. Оптимизация бактериальной продукции фермента LpxE достигнута за счет создания химерного белка SUMO-LpxE, в котором полипептид SUMO выступает в роли катализатора фолдинга и носителя аффинной мишени для очистки продукта экспрессии. Дополнительное повышение уровня синтеза LpxE и снижение его токсичности для бактериального штамма достигнуто на фоне суперпродукции бактериальных периплазматических шаперонов, кодируемых вспомогательной низкокопийной плазмидой. Последующая хроматографическая очистка целевого рекомбинантного белка включает использование аффинной металлхелатной хроматографии и этап отщепления протеазой SUMO пептида SUMO, несущего N-концевой пептид His6 с восстановлением природной первичной структуры фермента. Разработанный метод позволяет получить высокоочищенный активный фермент LpxE F.tularensis с выходом 0,26 г с литра бактериальной культуры без ферментации.

Авторы:

Издание: Молекулярная генетика ,микробиология и вирусология
Год издания: 2018
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2018.-N 1.-С.29-36. Библ. 36 назв.
Просмотров: 28