ПОЛУЧЕНИЕ, ОЧИСТКА И АНТИГЕННЫЕ СВОЙСТВА РЕКОМБИНАНТНОГО ПОЛИПЕПТИДА, ВКЛЮЧАЮЩЕГО СН2-СН3 ДОМЕНЫ FC-ФРАГМЕНТА ИММУНОГЛОБУЛИНА G ЧЕЛОВЕКА

Аннотация:

Получен рекомбинантный полипептид, содержащий аминокислотную последовательность СН2-СНЗ доменов иммуноглобулина G человека, в клетках Escherichia coli. Показано, что экспрессируемый белок неравнозначно распределён между двумя фракциями бактериального лизата: растворимой (—30%) и нерастворимой (~70%). Отработаны способы его очистки с помощью металлохеллатной хроматографии (растворимая фракция) и выделение «телец включения». Подтверждены антигенные свойства полученного рекомбинантного полипептида в иммуноблоттинге. Наработаны препаративные количества белка, который будет использован в качестве иммуногена для получения иммуноасцитических жидкостей, содержащих моноспецифические поликлональные антитела против IgG человека. Современные успехи в технологии рекомбинантных ДНК дают возможность получать и использовать в терапевтических, диагностических, научных целях отдельные компоненты (цепи, домены, фрагменты) молекулы иммуноглобулинов человека. Строение иммуноглобулинов как дискретных белковых доменов, определяющих антигенную специфичность (Fab-фрагмент) и эффекторные функции (Fc-фрагмент), соответственно, является основой для биосинтеза этих субфрагментов как отдельных белков. Ряд из них, таких как Fv, Fab, Fd, scFv и Fc, были экспрессированы с использованием прокариотических систем экспрессии. Демонстрация возможности получения биологически активных фрагментов иммуноглобулинов в простой при использовании и дешёвой системе Е. coli привела к появлению заметного интереса к этим исследованиям и синтезу большого количества «химерных» белков, используемых в диагностике и терапии. Тем не менее, для создания целого ряда белков, объединённых общим названием иммуноадгезинов и иммуноконъюгатов, где Fc-фрагмент был использован как «fusion»-пapтнep с другими протеинами, предпочтение было отдано эукариотической системе как обеспечивающей процесс гликозилирования, необходимого для активации комплемента. Целью настоящего исследования было оценить возможность биосинтеза в клетках E.coli рекомбинантного полипептида, содержащего СН2-СН3 домены иммуноглобулина G человека, отработать методы его очистки и оценить антигенные свойства.

Авторы:

Издание: Иммунология
Год издания: 2018
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2018.-N 1.-С.55-61. Библ. 8 назв.
Просмотров: 27