Клонирование и экспрессия бета-глюканазы Bacillus pumilus Bg57 в Pichia pastoris: очистка и характеристика рекомбинантного фермента

Аннотация:

Описана изоляция, гетерологическая экспрессия и характеристика новой бета-глюканазы из Bacillus pumilus. Ген bgll из штамма Bacillus pumilus Bg57 ВКПМ В-13195, состоящий из 729 пн, кодирует секретируемую эндо-бета-1,3(4)-D-глюканазу (Е.С. 3.2.1.6) включающую 214 а.о. и 28 N-концевых аминокислот предполагаемого сигнального пептида. Нуклеотидная последовательность гена bgll и аминокислотная последовательность зрелого белка Bgl имеют наибольшую гомологию с последовательностями бета-1,3- и бета-1,4-глюканазы Bacillus licheniformis (89% и 95% соответственно). Фрагмент гена, кодирующий зрелый белок, был экспрессирован в Pichia pastoris. Очищенный рекомбинантный фермент Bgl показал активность на бета-глюкане ячменя и лихенине. При использовании бета-глюкана ячменя в качестве субстрата оптимальный рН 6 и оптимальная температура 50 °С. Кm и Уmaх имели значения 2,2 мг/мл и 3036,4 мкмоль/мин-мг соответственно. Рекомбинантный белок Bgl показал высокую удельную активность, термостабильность и устойчивость к пищеварительным ферментам. Были также определены другие особенности рекомбинантного фермента, включая рН-стабильность и чувствительность к ионам металлов и химическим реагентам.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2018
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2018.-N 5.-С.12-22. Библ. 39 назв.
Просмотров: 32