СИНТЕЗ В Escherichia coli И ХАРАКТЕРИСТИКА РЕКОМБИНАНТНОГО ЭРИТРОПОЭТИНА ЧЕЛОВЕКА С ДОПОЛНИТЕЛЬНЫМ ГЕПАРИН-СВЯЗЫВАЮЩИМ ДОМЕНОМ

Аннотация:

Синтезом в клетках Escherichia coli получен рекомбинантный эритропоэтин человека (ЕРО), несущий на TV-конце дополнительный гепарин-связывающий белковый домен (HBD) из костного морфогенетического белка ВМР-2. Разработана схема выделения, очистки и рефолдинга, позволяющая получить высокоочищенный белок HBD-EPO со структурой, близкой к нативной, содержащей, как показано с помощью MALDI-TOF-масс-спектрометрического анализа, две дисульфидные связи. Белок обладает биологической активностью in vitro в пролиферативном тесте на линии клеток эритролейкемии человека TF-1, активностью in vivo в тесте по возрастанию количества ретикулоцитов в крови после подкожного инъекционного введения и проявляет местную ангиогенную активность при подкожной имплантации диска из деминерализованного костного матрикса (ДКМ) с иммобилизированным на нем HBD-EPO. Разработан количественный сэндвич-ИФА тест, основанный на использовании кроличьей поликлональной сыворотки и коммерческих моноклональных антител к эритропоэтину, позволяющий определять концентрацию белка HBD-EPO в растворе. Исследование фармакокинетики полученного эритропоэтина показало, что препарат сходен по характеристикам с другими эритропоэтинами, синтезированными в клетках бактерий. HBD-EPO обратимо связывается в физиологических условиях с деминерализованным костным матриксом (ДКМ), часто используемым в качестве остеопластического материала для лечения патологий костной ткани. Данные по связыванию HBD-EPO с ДКМ и проявляемому при его введении в организм местному ангиогенному эффекту позволяют надеяться на успех при использовании HBD-EPO, иммобилизированного на ДКМ, в экспериментах по регенерации костной ткани.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2018
Объем: 18с.
Дополнительная информация: 2018.-N 10.-С.1504-1521. Библ. 42 назв.
Просмотров: 25