ВЛИЯНИЕ ДОБАВЛЕННОЙ ДИСУЛЬФИДНОЙ СВЯЗИ НА СТРУКТУРУ И АКТИВНОСТЬ ПЕПТИДНОГО ФРАГМЕНТА ЭНДОСТАТИНА

Аннотация:

Было проведено сравнение структуры и функции содержащего 27 аминокислотных остатков TV-концевого фрагмента эндостатина человека (ES-Zn) и мутантного пептида (ES-SSZn), полученного в результате добавления к N-концевому участку ES-Zn трипептида Cys-Pro-Ala и замены аминокислотного остатка Asnl6 на остаток Cys с образованием дисульфидной связи. Сравнение структуры пептидов проводили с помощью метода кругового дихроизма в дальнем ультрафиолете, регистрации собственной (внутренней) флуоресценции и метода молекулярной динамики. Было показано, что в пептиде ES-SSZn по сравнению с ES-Zn наблюдаются значительные структурные изменения. Так, исчезает конформер бета-складчатой структуры, изменяется структура TV-концевой петли, а также динамические свойства остова всего пептида. По сравнению с ES-Zn и полноразмерным эндостатином человека ES-SSZn в условиях in vitro демонстрировал в ~2 и 3 раза меньший потенциал в индукции каспаза-3-зависимого апоптоза эндотелиальных клеток пупочной вены человека (Human umbilical vein endothelial cells, HUVECs) (p < 0,05). В то же время обработка клеток 4Т1 метастазирующих опухолей молочной железы у мышей пептидами ES-Zn и ES-SSZn в течение 14 дней в количестве 5 мг/кг/день приводило к сходному уменьшению размера опухоли и сравнимому снижению уровня ангиогенеза (CD31 и CD34) и пролиферации клеток (Ki67), и, следовательно, к сходной индукции апоптоза (TUNEL, р53 и Вс1-2) в сравнении с необработанными контрольными клетками. Анализ лизатов клеток HUVEC и опухолевых клеток 4Т1 с помощью вестерн-блоттинга также выявил сходную экспрессию пептидами ES-Zn и ES-SSZn ключевых медиаторов передачи сигнала, Akt и ERK1/2. В отличие от ранее полученных результатов, в настоящей работе показано, что активность исследованного фрагмента эндостатина не зависит от его строения, и укрепление структуры TV-концевой петли путем введения дисульфидной связи приводило к снижению уровня структурных изменений.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2018
Объем: 14с.
Дополнительная информация: 2018.-N 11.-С.1708-1721. Библ. 36 назв.
Просмотров: 29