ПОДВИЖНАЯ ПЕТЛЯ АКТИВНОГО ЦЕНТРА - НЕДООЦЕНЕННАЯ СТРУКТУРНАЯ ДЕТЕРМИНАНТА СУБСТРАТНОЙ СЕЛЕКТИВНОСТИ МЕТАЛЛОКАРБОКСИПЕПТИДАЗ

Аннотация:

Принято считать, что первичную субстратную специфичность металлокарбоксипептидаз определяет строение кармана первичной специфичности. Однако мутант карбоксипептидазы Т из Thermoactinomyces vulgaris, в котором, благодаря заменам G215S, A251G, Т257А, D260G, T262D, был полностью воспроизведен карман первичной специфичности панкреатической карбоксипептидазы В, сохранил присущую ферменту дикого типа каталитическую активность и широкую, преимущественно гидрофобную специфичность. С целью выяснения факторов, влияющих на субстратную специфичность металлокарбоксипептидаз, и причин расхождения со сложившимися представлениями нами была определена структура комплекса мутанта карбоксипептидазы Т с заменами G215S, A251G, Т257А, D260G и T262D с аналогом переходного состояния N-сульфамоил-L-фенилаланином с разрешением 1,35 А и проведено ее сравнение со структурой аналогичного комплекса, образованного карбоксипептидазой В. Сравнительное исследование позволило выявить ранее недооцененную структурную детерминанту субстратной специфичности металлокарбоксипептидаз и показало, что при мутации пяти аминокислотных остатков (а.о.) в кармане первичной специфичности карбоксипептидазы Т удается добиться практически полного структурного соответствия аналогичному карману в карбоксипептидазе В, однако это не приводит к принципиальному изменению субстратной специфичности мутанта из-за различий в строении подвижной петли, расположенной у входа в активный центр карбоксипептидаз и влияющей на индуцируемую субстратом конформационную перестройку этого центра.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2019
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2019.-N 1.-С.53-62. Библ. 39 назв.
Просмотров: 27