КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ПРОТЕОМНЫЙ АНАЛИЗ ЭКЗОСОМ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

Аннотация:

Экзосомы - мембранные микровезикулы, выделяемые клетками в биологические жидкости. Мембрана экзосом защищает их содержимое от деградации и содержит маркеры продуцирующей их клетки. Экзосомы продуцируются практически всеми клетками организма, клетки опухолей секретируют их особенно сильно. Однако, при исследовании функций этих внеклеточных везикул и идентификации опухолевых белковых биомаркеров в их составе на начальном этапе возникает серьезная проблема выделения чистых, охарактеризованных препаратов экзосом. В данной работе проведен количественный протеомный анализ экзосом сыворотки крови человека, полученных при помощи дифференциального ультрацентрифугирования, ультрацентрифугирования в градиенте плотности сахарозы или осаждения экзосомальной фракции сыворотки с использованием коммерческого набора Exosome Isolation Kil ("Invitrogen from ThermoFisher Scientific Baltics", UAB, Литва). Масс-спектрометрическими методами мониторинга выбранных реакций (SRM) и панорамного масс-спектрометрического анализа проведено определение белкового состава выделенных экзосом. Полученные препараты были охарактеризованы по содержанию основных маркеров (CD9, CD82, HSPA8, CD63). В образцах экзосом, выделенных из сыворотки здоровых добровольцев методом ультрацентрифугирования в градиенте плотности сахарозы, было определено содержание вышеуказанных маркеров, которое составило 32,85, 15,59, 6,07 фмоль на 1 мкг белка препарата экзосом, соответственно. Остальные методы, включая коммерческий набор, не дали положительных результатов. Результаты этого исследования показывают, что метод центрифугирования в градиенте плотности сахарозы является наиболее оптимальным для выделения экзосом.

Авторы:

Издание: Биомедицинская химия
Год издания: 2018
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2018.-N 6.-С.496-503. Библ. 18 назв.
Просмотров: 33