Оценка влияния индукции цитохрома Р450 на генотоксичность тетрахлорметана in vitro

Аннотация:

Введение. Одним из этапов патогенеза токсического действия тетрахлорметана является образование соединений активных форм кислорода с дезоксирибонуклеиновой кислотой (ДНК), приводящих к модификации азотистых оснований. Частота образования модифицированных азотистыми оснований нуклеотидов коррелирует с количеством одно- и двухцепочечных разрывов молекул ДНК. Инициатором образования активных форм кислорода и перекисного окисления липидов в клетках печени при поступлении тетрахлорметана является трихлорметильный радикал, образующийся при биотрансформации микросомальными ферментами цитохрома P450. Цель исследования — проанализировать изменения генотоксичности тетрахлорметана в гепатоцитах при нормальной и повышенной активности цитохрома Р450, вызванной воздействием индуктора (совола). Материалы и методы. Оценка генотоксичности выполнена методом ДНК-комет после затравки тетрахлорметаном культуры гепатоцитов мыши МН22а в 96-луночных микропланшетах без индукции цитохрома Р450 и при химической индукции цитохрома Р450 соволом. Определение содержания ДНК в хвосте комет (%), длины хвоста комет (мкм) и момента хвоста проводили в программе ImageJ 1.48. Статистический анализ результатов выполнен в программе SPSS Statistics 21. Результаты. Представлены экспериментальные данные о генотоксическом воздействии тетрахлорметана на гепатоциты клеточной линии МН-22а без индукции цитохрома Р450 и при химической индукции цитохрома Р450 соволом. Обнаружено, что 0,5 мМ раствор тетрахлорметана через 1 час после добавления в культуральную среду является генотоксичным для гепатоцитов МН-22а без применения совола (р<0,001). Отсутствие определяемых с помощью метода ДНК-комет признаков генотоксичности 5 мМ тетрахлорметана (р>0,05) в культуральной среде, вероятно, объясняется переходом клеток в состояние паранекроза. Генотоксический эффект не выявляется методом ДНК-комет после 3 и 24 часов инкубации гепатоцитов МН-22а с 0,5 и 5 мМ растворами тетрахлорметана без прединкубации с соволом (р>0,05), что может указывать на репарацию возникших повреждений. После 72 ч предварительной инкубации гепатоцитов с соволом и следующей за ней четырехчасовой затравки клеток 2,5 мМ раствором тетрахлорметана наблюдаются более высокие значения параметров ДНК-комет, чем при затравке тетрахлорметаном без инкубации с соволом (р<0,05). Выводы: По итогам проведенного исследования 72 ч индукции цитохрома P4S0 соволом повышает генотоксичность тетрахлорметана in vitro, по сравнению с 24 ч воздействия индуктора, что может косвенно указывать на более высокий уровень образовавшихся активных форм кислорода, вызванный повышенной соволом активностью ферментов цитохрома P450.

Авторы:

Издание: Медицина труда и промышленная экология
Год издания: 2019
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2019.-N 4.-С.206-211. Библ. 19 назв.
Просмотров: 32