Высокоактивные модифицированные варианты рекомбинантной фосфолипазы А2 Streptomyces violaceoruber для эффективного биосинтеза в дрожжах

Аннотация:

Фосфолипаза А2 (PLA2) применяется в различных отраслях промышленности, в частности, широко используется для улучшения эмульгирующих свойств яичного желтка. В настоящее время в России PLA2 не производится и является одним из наиболее востребованных и дорогостоящих ферментов. Основным препятствием на пути разработки дрожжевых продуцентов является токсичность высокоактивных PLA2, опосредованная их действием на фосфолипиды клеточных мембран. В этой связи ранее выполненные разработки дрожжевых продуцентов касались получения низкоактивных PLA2. В настоящей работе исследована возможность биосинтеза в дрожжах высокоактивной PLA2 штамма А-2688 S. violaceoruber. С целью увеличения эффективности экспрессии были сконструированы модифицированные варианты данного фермента, включавшие определенные аминокислотные замены, N- и С-концевые удлинения, а также инактивированные сайты N-гликозилирования. В результате исследований были отобраны модифицированные производные PLA2, удельная активность которых при сходной эффективности секреции, минимум, на порядок превосходила показатели ранее полученных низкоактивных PLA2. Отобранные варианты характеризовались пониженным сродством к ионам кальция Са2+, что, вероятно, обусловливало их низкую токсичность на этапе биосинтеза и возможность активации их в искусственных условиях, в том числе на яичном желтке, путем внесения в реакционные смеси ионов кальция. Представляется, что полученные варианты способны значительно удешевить применение PLA2 в отраслях промышленности, допускающих использование повышенных концентраций ионов кальция.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2019
Объем: 12с.
Дополнительная информация: 2019.-N 3.-С.30-41. Библ. 24 назв.
Просмотров: 34