ТЕЛЬЦА ВКЛЮЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ПОРИНА OmpF Yersinia pseudotuberculosis. ИХ СВОЙСТВА И СТРУКТУРНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

Аннотация:

Зрелый порообразующий белок OmpF из наружной мембраны Yersinia pseudotuberculosis экспрессировали в форме телец включения (ТВ) в Escherichia coli при разных условиях культивирования. С помощью электронной микроскопии, динамического светорассеяния, оптической спектроскопии и специфических гидрофобных красителей исследовали свойства и структурную организацию ТВ, а также структуру рекомбинантного порина (rOmpF), растворенного из них. Для ТВ определены размер, форма и стабильность в присутствии денатурантов. Показано, что ТВ хорошо растворимы в Ds-Na и более устойчивы, по сравнению с детергентом, к действию мочевины. Растворение ТВ в обоих денатурантах приводило к образованию гетерогенной по размеру популяции олигомерных частиц. Установлено, что ТВ содержат интермедиат rOmpF с выраженной вторичной структурой, близкой к нативной, и с элементами третичной структуры, который способен встраиваться в липидный бислой, приобретая функционально активную конформацию. Исследованные ТВ, которые образуются при разной концентрации индуктора (ИПТГ), заметно не различаются между собой по свойствам и структуре. Однако следует отметить, что с увеличением концентрации индуктора в ТВ возрастает содержание амилоидных структур, что может рассматриваться как неблагоприятный фактор, снижающий выход рекомбинантного белка. Полученные результаты вносят вклад в развитие новых подходов для получения активных белков из ТВ, а также ТВ, обладающих биологической и функциональной активностью.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2019
Объем: 15с.
Дополнительная информация: 2019.-N 6.-С.859-873. Библ. 31 назв.
Просмотров: 28