BRCA1 УЧАСТВУЕТ В ЛОКАЛИЗАЦИИ РНК XIST НА НЕАКТИВНОЙ Х-ХРОМОСОМЕ

Аннотация:

Инактивированная Х-хромосома (XI) ассоциирована с некодирующей PHKXIST, с целым рядом белков и содержит многочисленные эпигенетические модификации хроматина, что приводит к ингибированию экспрессии большинства генов на этой хромосоме. В последние годы были получены данные, свидетельствующие о том, что супрессор опухолей BRCA1 также взаимодействует с XL Цель исследования — выявить колокализацию BRCA1 и PHKXIST и детально проанализировать пространственную организацию BRCA1 и PHKXIST на Xi с помощью конфокальной микроскопии с высоким пространственным разрешением и контрастом. Материалы и методы. Объектом исследования служили диплоидные иммортализованные фибробласты человека линии IMR90hTERT. Для локализации BRCA1 и РНКXISTна Xi использовали метод флуоресцентной гибридизации in situ, сопряженный с иммунофлуоресцентным окрашиванием клеток, и конфокальную микроскопию. Для локализации BRCA1 и белков гетерохроматина-1 использовали метод двойного иммунофлуоресцентного окрашивания клеток и традиционную флуоресцентную микроскопию. Результаты. Впервые исследования, проведенные с использованием конфокальной микроскопии, продемонстрировали на более высоком уровне разрешения, чем было представлено в предыдущих работах, колокализацию BRCA1 с зоной РНК XIST на Xi, выявленную с зондами к PHKXIST. С помощью BrdU выявлена также локализация BRCA1 с реплицирующимися участками Xi и аутосомами в поздней S-фазе клеточного цикла. В целом приведенные данные позволяют предположить участие BRCA1 в ингибировании экспрессии генов на Xi, обусловленном влиянием BRCA1 на ассоциацию РНК XIST с Xi. Помимо этого, впервые с использованием конфокальной микроскопии выявлена колокализация BRCA1 с реплицирующимися Xi и аутосомами, идентифицированными с использованием BrdU, в поздней S-фазе клеточного цикла, что указывает на возможное участие этого белка в репликации перицентромерных повторов хромосом. В поддержку этой гипотезы также свидетельствуют данные о колокализации BRCA1 с белком гетерохроматина- 1а, присутствующим в перицентромерных участках всех хромосом. Заключение. Полученные данные указывают на участие BRCA1 в ингибировании экспрессии генов на Xi в результате регуляции ассоциации некодирующей ингибирующей PHKXIST с Xi, а также в репликации гетерохроматиновых участков хромосом.

Авторы:

Издание: Российский биотерапевтический журнал
Год издания: 2019
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2019.-N 2.-С.21-26. Библ. 11 назв.
Просмотров: 26