ТЕРМОСТАБИЛЬНАЯ ЛИХЕНАЗА Clostridium thermocellum ДОПУСКАЕТ ОДИНОЧНЫЕ И ТАНДЕМНЫЕ ИНСЕРЦИИ БЕЛКОВЫХ ДОМЕНОВ

Аннотация:

В этом исследовании лихеназа Clostridium thermocellum (эндо-В-1,3;1,4-глюкан-D-гликозилгидролаза, ЕС 3.2.1.73 (Р29716)) апробирована в роли белка, принимающего в двух областях инсерцию двух модельных флуоресцентных белков (EGFP и TagRFP). Функциональная укладка всех доменов подтверждена сохранением ферментативной активности лихеназы и флуоресценции EGFP и TagRFP. Полученные результаты убедительно свидетельствуют, что (i) два экспериментально апробированных петлевых региона лихеназы могут служить областями для инсерции белков без нарушения ее фолдинга in vivo, (ii) лихеназа способна допускать не только одиночные, но и тандемные вставки крупных белковых доменов. Высокая активность и термостабильность, эффективный рефолдинг in vitro лихеназы делает ее привлекательной в качестве нового принимающего «hoste-белка при использовании подхода инсерционного слияния доменов в инженерии многофункциональных белков. Одно из ключевых направлений в инженерии белков связано с дизайном и конструированием слитых белков, биомолекул, состоящих из двух или более белков и/или пептидов, которые синтезируются как единая белковая конструкция. Для инженерии таких белков используют стратегию прямого «слияния» белков (или стратегия «голова к хвосту») или стратегию инсерции доменов. Стратегия «голова к хвосту» достаточно проста и применяется в тех случаях, когда гибкие и неструктурированные N- или С-концевые области белка выступают в качестве «моста», чтобы обеспечить достаточное пространство между доменами белков для их правильной укладки. Помимо этого, возможно объединение белков через линкерный пептид, который предназначен для разделения белков и поддержания благоприятного взаимодействия между ними. Имеется немало успешных примеров создания рекомбинантных белков с использованием стратегии прямого «слияния» для различного биотехнологического и биофармацевтического применения.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2019
Объем: 12с.
Дополнительная информация: 2019.-N 8.-С.1177-1188. Библ. 44 назв.
Просмотров: 28