Экспрессия гена бета-глюканазы из Paenibacillus jamilae Bgl в Pichia pastoris и характеристика рекомбинантного белка

Аннотация:

Описана изоляция, гетерологическая экспрессия и характеристика новой термостабильной В-глюканазы из Paenibacillus jamilae. Ген bgl26 из штамма P. jamilae Bgl ВКПМ В-13093, состоящий из 714 нуклеотидов, кодирует эндо-1,3-1,4-В-глюканазу (ЕС 3.2.1.73) из 213 аминокислот и 24 остатков предполагаемого сигнального пептида в N-концевой области. Нуклеотидная последовательность гена bgl26 и аминокислотная последовательность зрелого белка Bgl26 имеют наибольшую гомологию с последовательностями эндо-1,3-1,4-В-глюканазы Paenibacillus macerans (82 и 88%, соответственно). Фрагмент гена, кодирующий зрелый белок, был экспрессирован в Pichia pastoris. Очищенный рекомбинантный фермент Bgl26 показал активность на В-глюкане ячменя. Оптимальный рН для работы фермента был равен 7, а оптимальный интервал температур составил 40-45°С. Удельная активность В-глюканазы была на уровне 6650 ед/мг белка, Кm и Vmax имели значения 6,4±0,3 мг/мл и 9450,1±471,2 мкмоль/мин мг, соответственно. Рекомбинантный белок Bgl26 характеризовался высокой рН- и термостабильностью, а также устойчивостью к пищеварительным ферментам. Показано также, что ионы Со2+ оказывают позитивное влияние на активность фермента.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2019
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2019.-N 4.-С.15-23. Библ. 27 назв.
Просмотров: 21