Экспрессия гена ксиланазы из Pyromyces finnis в Pichia pastoris и характеристика рекомбинантного белка

Аннотация:

Описана гетерологическая экспрессия и характеристика новой ксиланазы из Pyromyces finnis. Эндо-1,4-B-ксиланаза XylP (ЕС 3.2.1.8) состоит из 223 аминокислот и 19 остатков предполагаемого сигнального пептида в N-концевой области. Аминокислотная последовательность зрелого белка имеет наибольшую гомологию с последовательностью нативного каталитического N-терминального домена эндо-1,4-В-ксиланазы из Neocallimastix patriciarum (84%). Синтетическая нуклеотидная последовательность, кодирующая зрелый белок XylP, была экспрессирована в Pichia pastoris. Очищенный рекомбинантный фермент показал активность на ксилане березы и арабиноксилане. При использовании ксилана березы в качестве субстрата оптимальный рН - 5, а оптимальная температура - 50°С. Значение удельной активности ксиланазы составило 4700 ед/мг белка, Кm и Vmax имели значения 0,51 мг/мл и 7395,3 мкмоль/мин мг, соответственно. Рекомбинантный белок XylP показал умеренную термостабильность и высокую рН-стабильность, устойчивость к пищеварительным ферментам и белковым ингибиторам ксиланаз зерна. Показано также, что ионы Mg2+, Со2+ и Li+ оказывают позитивное влияние на активность фермента.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2019
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2019.-N 4.-С.24-32. Библ. 28 назв.
Просмотров: 32