БИОСЕНСОРНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ БЕЛКОВ С КОРОВОЙ ЧАСТЬЮ ПРОТЕАСОМЫ

Аннотация:

Становится всё более очевидным, что убиквитинирование внутриклеточных белков не является обязательным этапом, необходимым для их деградации в протеасомах. Известно немало подлежащих элиминации белков, которые не подвергаются предварительному убиквитинированию для узнавания регуляторными субчастицами 26S протеасомы, а поступают непосредственно в её коровую (протеолитическую) часть - 20S протеасому. Необходимым условием для этого является наличие в белке неструктурированных участков. В данной работе исследовали связывание ряда полифункциональных белков (глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа (ГАФД), альдолаза, пируваткиназа), а также белков, участвующих в процессах нейродегенерации (а-синуклеин, «основной белок миелина), с иммобилизованной на чипе SPR-биосенсора Biacore 20S протеасомой. Для предотвращения возможной диссоциации 20S протеасому в ходе иммобилизации стабилизировали при помощи бифункционального сшивающего реагента — диметилпимелимидата. Из всех исследованных белков только альдолаза и пируваткиназа взаимодействовали с 20S протеасомой (КА соответственно 8,17x10"' М и 5,56x10"' М). В дополнение к ранее обнаруженному убиквитинированию ГАФД, масс-спектрометрический анализ препаратов этих белков выявил наличие так называемой убиквитиновой сигнатуры Lys-e-Gly-Gly только в препарате альдолазы. Окисление пируваткиназы и альдолазы, способствующее элиминации белков в результате их непосредственного взаимодействия с 20S протеасомой, приводило к снижению Кй в 2-3 раза по сравнению с интактными белками. Полученные результаты свидетельствуют в пользу того, что с 20S протеасомой одинаково эффективно связываются как убиквитинированные (альдолаза), так и неубиквитинированные (пируваткиназа) белки.

Авторы:

Издание: Биомедицинская химия
Год издания: 2019
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2019.-N 4.-С.306-310. Библ. 30 назв.
Просмотров: 18