Изучение ферментативной активности рекомбинантной металлопептидазы, предназначенной для применения в мясной промышленности

Аннотация:

Ферментная модификация мясного сырья с высоким содержанием соединительной ткани - перспективное направление мясной отрасли, позволяющее улучшить его свойства и расширить возможности использования. Для получения гидролизованных форм такого сырья активно используются ферментные препараты микробного происхождения. Необходимым условием применения этих препаратов в пищевой промышленности является соответствие требованиям безопасности в части прогнозирования развития различных рисков. В статье рассматривается способ получения рекомбинантной протеазы, применение которой перспективно в пищевой промышленности для обработки мясного сырья с целью его умягчения. Цель работы - создание генетической конструкции на основе Pichia pastoris с высоким уровнем экспрессии в ней чужеродного гена пептидазы М9 Aeromonas salmonicida. Материал и методы. Объекты исследования: ген пептидазы М9 (GenBank: СР000644.1 ASA 3723) Aeromonas salmonicida (штамм лабораторной коллекции, выделен с поверхности мясного сырья), векторная плазмида pPic9K, компетентные клетки Е. coli DH5a, компетентные клетки Pichia pastoris GS115, культуральная жидкость (КЖ) от рекомбинантных клонов Pichia pastoris, образцы говяжьей голяшки. Для получения рекомбинантного штамма использовали методы генетической инженерии, полимеразной цепной реакции, бактериологический метод. Для разделения и анализа компонентов культуральной жидкости использовали электрофорез в полиакриламидном геле. Ферментативную активность оценивали методом ВЭЖХ-МС/МС с использованием искусственно синтезированных пептидов. Воздействие культуральной жидкости от рекомбинантных клонов на соединительную ткань мясного сырья оценивали гистологическим методом. Результаты и обсуждение. Проведено встраивание гена пептидазы М9 длиной 2748 базовых пар нуклеотидов в вектор pPic9K. На электрофореграмме белков культуральной жидкости, полученной от рекомбинантых клонов Pichia pastoris со вставкой гена пептидазы М9 Aeromonas salmonicida, выделен целевой белок в 120 кДа. В результате проведенных гистологических исследований образцов мясного сырья было установлено влияние полученной от рекомбинантных клонов культуральной жидкости на структуру соединительной ткани. Заключение. Рекомбинантный штамм Pichia pastoris, продуцент рекомбинантной пептидазы М9 Aeromonas salmonicida, обладает специфичной ферментативной активностью в отношении коллагена - основного компонента соединительной ткани мяса. Полученная рекомбинантная пептидаза М9 может быть использована в качестве фермента-умягчителя мясного сырья с повышенным содержанием соединительной ткани.

Авторы:

Издание: Вопросы питания
Год издания: 2019
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2019.-N 4.-С.95-104. Библ. 18 назв.
Просмотров: 28