Оптимизация экспрессии гена 1,3-1,4-бета-глюканазы Rhizomucor miehei в дрожжах Komagataella kurtzmanii

Аннотация:

Проведена оптимизация ключевых функциональных элементов вектора (промоторной, лидерной и терминаторной областей), обеспечивающих экспрессию целевого гена 1,3-1,4-бета-глюканазы Rhizomucor miehei в дрожжах Komagataella kurtzmanii. Показано, что в составе вектора в клетках реципиентного штамма К. kurtzmanii Y727his4 промоторные области гена АОХ1 дрожжей Komagataella pfaffti (бывш. Pichia pastoris) и К. kurtzmanii обеспечивали равный уровень экспрессии целевого гена, т.е. оказались полностью взаимозаменяемыми. Это означает, что генетические конструкции, ранее разработанные для биосинтеза рекомбинантных белков в К. pfaffii, будут обеспечивать эффективную экспрессию и в дрожжах К. kurtzmanii. Среди пяти проанализированных лидерных последовательностей статус наиболее высокоэффективных элементов подтвердили лидерный пептид MF4I, использованный в работе в виде варианта mif4I, содержавшего одну аминокислотную замену, а также лидерный пептид тахНН, содержавший удвоенную про-область белка Hspl50 дрожжей S.cerevisiae. Их эффективность в 1,7 раза превысила показатель стандартной лидерной области альфа-фактора дрожжей и на 20% - показатели второй группы искусственных лидеров. В то же время, как было установлено, среди всех функциональных элементов вектора наиболее сильное влияние на экспрессию целевого гена оказал выбор терминаторной области. При этом лучшими терминаторными элементами оказались производные области терминации транскрипции гена AOXI, а разница в уровне экспрессии целевого гена с использованием разных терминаторов составила примерно 4,5 раза. На основании анализа полученных данных был экспериментально определен оптимальный состав ключевых функциональных элементов вектора экспрессии, включавший промоторную и терминаторную области гена АОХ1 дрожжей, а также один из вариантов искусственных лидеров mif4I или mахНН.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2019
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2019.-N 5.-С.3-11. Библ. 25 назв.
Просмотров: 25