ОПЫТ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ИММУНОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ YERSINIA PESTIS В ПРОБАХ БЛОХ

Аннотация:

Иммунохроматографическая тест-система для экспресс-выявления и идентификации возбудителя чумы «ИХ тест-система Y. pestis» производства ФБУН ГНЦ ПМБ, Оболенск (ИХ-тест), апробирована для применения на бактериальных взвесях и суспензиях органов млекопитающих [Белькова и цр., 2009; Belkova, Balakhonov, Biketov, 2011; Белькова, Балахонов, 2014; Ярыгина и др., 2017]. Нами эбнаружена их пригодность для экспресс-исследования проб блох. Цель работы: описание опыта использования ИХ-тестов для выявления возбудителя чумы в суспензиях блох и рассмотрение его зозможностей при эпизоотологическом обследовании природных очагов чумы. В мобильной лаборатории мониторинга и диагностики (МЛМД), задействованной в эпизосто-тогическом обследовании монгольской части трансграничного Сайлюгемского природного очага, ак-гивно использовали «ИХ тест-систему Y. pestis», в том числе для исследования блох. Добытых эктопаразитов после таксономической идентификации и деления на пробы обрабатывали в гомогенизаторе Tissue Lyser LT (QIAGEN, Германия) в течение 2 мин с добавлением 300 мкл физиологического эаствора. По 100 мкл проб, только что переведенных в жидкую фазу, вносили в приёмное круглое экошко ИХ-теста. Все манипуляции проводили в БМБ II Б класса. За обследовательский сезон 2018 г. эыла проведена экспресс-диагностика четырёх индивидуальных проб блох Oropsylia silantiewi с l-ll ;тадиями переваривания крови, снятых с сурков - две с одного и того же остатка стола хищных птиц, эдна с агонирующей молодой самки и одна с отстрелянного взрослого самца. В двух первых случаях наблюдали положительный результат, который проявлялся двумя параллельными окрашенными no-юсами в прямоугольном окошке. В отличие от положительных проб млекопитающих тестовая (опытная) полоса в соответствующих пробах блох была бледнее контрольной, что неудивительно, учитывая степень разведения исходного материала (содержимое желудка одной блохи). Впоследствии из этих проб, так же как и из образцов от млекопитающих, показавших положительный результат в ИХ-гесте (всего 39 проб), методом ПЦР в режиме реального времени были амплифицированы специфи-неские фрагменты ДНК Yersinia pestis и изолированы культуры эпидемиологически значимого вариан-га возбудителя чумы - Y. pestis subsp. pestis. В период совместного российско-монгольского обследования Хархиро-Тургенского очага в 2019 г. этим же экспресс-методом обнаружен специфичный антиген возбудителя чумы в трёх группо-зых пробах блох: Amphipsylla primaris, Citeilophilus tesquorum и Ctenophyllus hirticrus, в дальнейшем подтверждённый генодиагностически с помощью двух коммерческих тест-систем: «Амплисенс Yersinia pestis-FL» (ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, г. Москва) и «Ген Yersinia pestis индикация - РГФ» (ФКУЗ РосНИПЧИ «Микроб» Роспотребнадзора). Все блохи счёсаны с одного длиннохвостого суслика, исследованного с отрицательным результатом. Культуры У. pestis из этих проб выделить не удалось. А всего из 8 проб, исследованных в ИХ-тесте (и ПЦР) с положительным результатом, была выделена только одна культура, что, вероятно, объясняется утратой ростовых свойств питательных сред, предоставленных монгольской стороной. Капсульный антиген (F1), являющийся мишенью для обнаружения в «ИХ тест-система Y. pestis», не экспрессируется в блохах, более того, длительнее пребывание возбудителя з переносчике может сопровождаться нарушением синтеза клеточной стенки и переходом в L-форму, требующую особых условий культивирования. [Базанова и др., 1990]. Поэтому экспресс-исследование блох в ИХ-тесте имеет смысл в следующих случаях: только свеженапившиеся эктопаразиты, при подозрении на заболевания чумой потенциальных носителей (находки трупов, остатков стола хищников), в обычные для обострения эпизоотической ситуации сроки. Выводы: 1. Обнаружена пригодность «ИХ тест-система Y. pestis» для экспресс-исследования блох с I-II стадиями переваривания крови (содержимое желудка с ровными краями, красное или с красным оттенком). 2. Пробы блох с положительными результатами в ИХ-тесте наиболее перспективны для выделения культуры возбудителя и могут быть исследованы бактериологически параллельно с постановкой ПЦР, не дожидаясь результата последней. 3. Образцы блох с положительными результатами в ИХ-тесте, собранных со здоровых носителей или из входов нор, однозначно свидетельствуют о манифестных формах инфекции и активной фазе эпизоотии.

Авторы:

Издание: Дальневосточный журнал инфекционной патологии
Год издания: 2019
Объем: 2с.
Дополнительная информация: 2019.-N 37.-С.76-77. Библ. 0 назв.
Просмотров: 33