ЗИМОГРАФИЧЕСКОЕ ВЫЯВЛЕНИЕ ГИДРОЛАЗ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ОСОБО ОПАСНЫХ ИНФЕКЦИЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ПРИРОДЫ

Аннотация:

Зимография - это комплекс высокочувствительных электрофоретических методов в полиакриламидном геле (ПААГ) с сополимеризованными субстратами для детекции и анализа соответствующих гидролитических ферментов в сложных биологических смесях. Преимуществом зимографии является возможность прямой визуализации каталитической активности и состава исследуемых энзимов без предварительной подготовки по их выделению и очистке, что удешевляет и упрощает процесс первоначального исследования этих ферментов. Возрастающий интерес к работе гидролаз обусловлен их разнообразием и широким диапазоном биологических функций у патогенных микроорганизмов, по наличию и активности которых можно изучать такие явления как катаболизм, экологические взаимодействия, способность к генерации молекулярных сигналов и образованию биоплёнок, что в свою очередь позволяет устанавливать их патогенетическую роль и определять адаптационный потенциал у таких наиболее значимых в инфекционной патологии человека этиологических агентов как Vibrio cholerae, Francisella tularensis и Bacillus anthracis. Цель работы - выявить наличие и состав внутриклеточных и секретируемых гидролитических ферментов у V. cholerae 01 и 0139 серогрупп, F. tularensis разных подвидов, В. anthracis Sterne 34 F2 зимографией в полиакриламидном геле с сополимеризованными субстратами. Объектом для исследования служили препараты субклеточных фракций V. cholerae 01 и 0139 серогрупп и F. tularensis разных подвидов, культуральные фильтраты V. cholerae, и бесклеточные экстракты S-1 и S-2 из аспорогенного вакцинного штамма В. anthracis Sterne 34F2. Субклеточные фракции холерного вибриона и туляремийного микроба получали по методу [Марков, 2000]. Культуральные супернатанты V. cholerae были получены из бакмассы, выращенной на МПА при 37°С в течение суток и смытой физраствором в МПБ с рН 7,6. После двухчасовой инкубации при комнатной температуре в флаконы с МПБ для стерилизации добавляли мертиолят натрия и инкубировали двое суток на холоду. После контроля стерильности материал центрифугировали, после чего сулернатант диализовали и лиофильно высушивали. Бесклеточные экстракты В. anthracis получали по методу [Баркова, 2008] в некоторой модификации [Дубровина, 2018]. Зимографию проводили электрофорезом в блоках 8 % ПААГ, импрегнированного желатином, казеином, лецитином, муцином, фибрином, коллоидным хитином и гликольхитозаном. О наличии ферментативной активности судили по образованию бесцветных полос на фоне окрашенного Кумасси R-250 геля. Таким образом, с помощью зимографии в ПААГ впервые проведено выявление гидролаз бактерий - возбудителей ООИ и установлены различия в их спектре в зависимости от происхождения и вирулентности штаммов.

Авторы:

Издание: Дальневосточный журнал инфекционной патологии
Год издания: 2019
Объем: 2с.
Дополнительная информация: 2019.-N 37.-С.90-91. Библ. 0 назв.
Просмотров: 36