Изучение характера контаминации сырого молока бактериями рода Campylobacter с использованием традиционных микробиологических методов и количественного ПЦР-анализа

Аннотация:

Гастроэнтероколиты, вызванные бактериями рода Campylobacter; представляют собой наиболее распространенные острые инфекционные зоонозные заболевания с пищевым путем передачи. Одним из важных факторов передачи инфекции является контаминированная молочная продукция, поэтому оценка загрязненности молочного сырья кампилобактерами необходима для разработки эффективных мер подавления роста возбудителя и обеспечения безопасности продуктов. Цель исследования - изучение микробного фона образцов сырого молока и характера, контаминации их термофильными бактериями рода Campylobacter. Исследовано 60 проб сырого молока из центральных областей РФ и 48 экспериментально зараженных кампилобактериями образцов молочного сырья. Для оценки микробной контаминации молока определяли количество посторонней микрофлоры, включая колиформные бактерии (БГКП). Выявление и определение количества бактерий рода Campylobacter проводили культуральными методами в сопоставлении с количественным анализом методом полимеразной цепной реакции (ПЦР-анализ). Для ПЦР использовали праймеры, детектирующие видоспецифическую последовательность 16s рРНК С. jejuni, наличие гена цитолетального токсина cdtB и гена инвазии ciaB. В результате значительная часть исследованных проб сырого молока (31,6%) характеризовалась высокими уровнями микробной контаминации, превышающими 106 КОЕ/см?. Грамотрицательные бактерии являются доминирующим видом бактериальной микрофлоры, их уровни были сопоставимы с выявленными величинами общего количества микроорганизмов. БГКП обнаружены во всех исследованных образцах, их количество в 90% образцов достигало 105 КОЕ/см3, а в отдельных пробах - 107 КОЕ/см3. Частота обнаружения Campylobacter spp. в сыром молоке составила 8,3%, а их количество колебалось в пределах от 0,1 до 100 КОЕ/см3 (в среднем 2,0x10 КОЕ/см3). Все выделенные штаммы кампилобактеров по комплексу фенотипических признаков были идентифицированы как вид С. jejuni. Проведен сравнительный анализ загрязненности сырого молока кампилобактерами методом ПЦР-РВ. Большинство проб (свыше 60%) были позитивными по наличию родоспецифической геномной последовательности 16SрРНК. при этом они характеризовались наиболее высокими значениями общей бактериальной обсемененности и количества БГКП. Применение мультипраймерного подхода (одновременное тестирование на наличие 16SpPHK и гена цитолетального токсина cdtB С. jejuni) уменьшало число позитивных случаев обнаружения ДНК кампилобактеров до 16.6%, что позволяет предполагать большую информативность гена cdtB в отношении выявления жизнеспособных, в том числе некультивируемых, клеток, обладающих токсигенностью. Ориентировочная оценка результатов в количественном, формате свидетельствовала о высоких выявляемых уровнях бактерий рода Campylobacter - 104-106>5 геномных эквивалентов/см3, что указывает на возможное наличие жизнеспособных клеток Campylobacter в исследуемом материале со значительно большей частотой, чем установлена при культуральном посеве. Заключение. Микробиологические методы посева при низких уровнях контаминации кампилобактерами не обеспечивают их достоверного выявления вследствие массивного загрязнения сырья посторонней микрофлорой. Campylobacter spp. обнаружены культуральным методом в 8,3% случаев, тогда как применение мультипраймерного ПЦР-анализа с генами cdtB и ciaB позволяет увеличить в 2 раза выявление С. jejuni в пробах сырого молока.

Авторы:

Издание: Вопросы питания
Год издания: 2019
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2019.-N 5.-С.17-23. Библ. 13 назв.
Просмотров: 24