Свойства и биотехнологическое применение мутантных производных мини-интеина PRP8 Penicillium chrysogenum с улучшенным контролем С-концевого процессинга

Аннотация:

Охарактеризованы мутантные варианты мини-интеина PRP8 Penicillium chrysogenum (рабочее название Int4b), обладающие улучшенным контролем С-концевого процессинга. Представленные варианты могут служить основой самоудаляемых полипептидных тагов, способных нести аффинную метку и оптимизировать процесс получения целевых белков и пептидов в клетках Е. coli. Они позволяют синтезировать целевые молекулы в составе растворимых и нерастворимых гибридных белков (фьюжнов), обеспечивают их аффинную очистку, автокаталитический процессинг и получение зрелых целевых продуктов. По сравнению с известными прототипами представленные варианты обладают рядом особенностей. В частности, мутантный мини-интеин Int4bPRO, содержащий мутацию L93P, обладает температурно-зависимыми свойствами. При температуре культивирования клеток ниже 30 °С он позволяет получать целевые молекулы в составе растворимых фьюжнов, а при увеличении температуры до 37 °С направляет большинство синтезируемых фьюжнов в нерастворимые внутриклеточные агрегаты. Переход Int4bPRO в нерастворимое состояние сопровождается полной инактивацией С-концевого процессинга. Далее стандартные процедуры денатурации/ренагурации белков эффективно реактивируют Int4PRO и происходит процессинг его фьюжнов in vitro. Два других варианта Int4b56 и Int4b36, содержащих точечную мутацию T62N и комбинацию мутаций D144N и L146T, соответственно, обладают пониженной скоростью С-концевого процессинга. Их использование в клетках Е. coli позволяет оптимизировать биосинтез биологически активных целевых белков и пептидов в составе растворимых фьюжнов, пригодных для аффинной очистки и последующего ингеин-зависимого процессинга без использования процедуры денатурации/ренатурации белков.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2019
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2019.-N 6.-С.91-101. Библ. 35 назв.
Просмотров: 32