СКРИНИНГ УСЛОВИЙ РЕФОЛДИНГА И ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО АНТИСТАФИЛОКОККОВОГО ЭНДОЛИЗИНА LysKcA В АКТИВНОЙ ФОРМЕ ИЗ ТЕЛЕЦ ВКЛЮЧЕНИЯ Еcoli

Аннотация:

Предложен пошаговый скрининг основных характеристик рефолдинг-буфера, с использованием которого из телец включения Е. coli получен в активной форме рекомбинантный антистафилококковый эндолизин LysK, содержащий два каталитических домена — CHAP и амидазу-2. Определены оптимальные значения рН, температуры, окислительно-восстановительного потенциала рефолдинг-буфера и установлены оптимальные конечные концентрации белка, мочевины и тип антиагрегационного соединения. Выяснен состав системы ренатурации антистафилококкового эндолизина, который при 10°С и разведении целевого белка до конечной концентрации 150 мкг/мл содержал 20 мМ натрий-фосфатного буфера, рН 7.4, содержащего 2.5 мМ ДТТ и 0.4 М сахарозы. Выход рефолдинга после масштабирования составил 29.5 ± 6.7%, что позволило получить 16 ± 2.3 мг целевого белка из 2.25 г отмытых телец включения с ферментативной активностью 1.8 ± 0.73 х 103 МЕ/мг.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2020
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2020.-N 1.-С.52-59. Библ. 30 назв.
Просмотров: 19