ДЕТЕКЦИЯ МИКОПЛАЗМ В КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЯХ ЭУКАРИОТ МЕТОДОМ ПЦР В РЕАЛЬНОМ ВРЕМЕНИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РАЗЛИЧНЫХ СПОСОБОВ КОНЦЕНТРИРОВАНИЯ ОБРАЗЦА

Аннотация:

Детекция микоплазменной контаминации — важный этап контроля качества клеточных линий эукариот, как используемых при производстве биотехнологических лекарственных препаратов, так и входящих в состав биомедицинских клеточных продуктов. Предложенные в Государственной Фармакопее методы анализа: микробиологический (культуральный) и цитохимический (индикаторной клеточной культуры) выполняются в течение нескольких суток, сложно стандартизуются, а их результат субъективно интерпретируется оператором. Альтернативные молекулярно-генетические методы анализа, наиболее широко используемым из которых является ПЦР, отличаются экспрессностью, однако менее чувствительны. Для решения данной проблемы используют предварительное концентрирование образца клеточной линии. В настоящем исследовании мы сравнили эффективность различных способов пробоподготовки образца, оценили влияние его состава на параметры процесса концентрирования, а также провели валидацию комбинированной методики детекции на примере двух видов микоплазм: Mycoplasma arginini и Acholeplasma laidlawii. Контаминация клеточных линий бактериями класса Mollicutes, в том числе микоплазмами, ахолеилазмами и уреаплазмами, является одной из наиболее часто встречающихся проблем при культивировании клеток эукариот. Согласно литературным данным, доля контаминированных линий варьируется от 15 до 80% в зависимости от типа клеток, источника их получения и методов культивирования. Продукты на основе соматических клеток человека перед введением пациенту обязательно должны быть протестированы на присутствие микоплазм. В ГФ XIV (ОФС. 1.7.2.0031.15 "Испытание на присутствие микоплазм"), Европейской Фармакопее (раздел 2.6.7.) и Фармакопее США (раздел 63) описаны методы детекции данного контаминанта: микробиологический (культуральный) и цитохимический (индикаторной клеточной культуры). Также заявлены требования к чувствительности методов детекции на уровне 10—100 КОЕ/мл.

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2020
Объем: 8с.
Дополнительная информация: 2020.-N 1.-С.56-63. Библ. 18 назв.
Просмотров: 24