ХАРАКТЕРИСТИКА КОМПЛЕКСОВ, ПОЛУЧЕННЫХ МЕТОДОМ БИОКОНЪЮГАЦИИ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ЧАСТИЦ ВТМ И КОНСЕРВАТИВНОГО АНТИГЕНА ВИРУСА ГРИППА А

Аннотация:

Получены биокомплексы вирион—белок между генетически модифицированными частицами вируса табачной мозаики (ВТМ, tobacco mosaic virus, TMV) и рекомбинантным белком, несущим консервативный антиген эпитоп М2е вируса гриппа. Вирусный вектор TMV-N-lys был создан на основе генома ВТМ штамма U1 путем внесения остатка реакционно-способного лизина (lys) в N-концевую область белка оболочки (БО), экспонированную на поверхности частиц. Растения Nicotiana benthamiana инокулировали культурой агробактерии, трансформированной TMV-N-lys. Вирионы TMV-N-lys были выделены из экстрактов системных листьев. Анализ препарата TMV-N-lys с помощью электрофореза в полиакриламидном геле показал наличие белка с подвижностью ~21 кДа. Электронная микроскопия препарата TMV-N-lys подтвердила стабильность модифицированных вирусных частиц. Химическое связывание частиц TMV-N-lys и М2е-антигена вируса гриппа, эспрессированного в Е. соll, производили с помощью 5 шМ 1-этил-3-(3-диметил-аминопропил)-карбодиимида (EDC) и 1 шМ N-гидроксисукцинимида (NHS). Вестерн-блот анализ подтвердил наличие комплексов, образованных рекомбинантным белком и модифицированными частицами TMV-N-lys. Диаметр комплексов практически не отличался от исходных вирионов TMV-N-lys, но биокомплексы образовывали высокоорганизованную и разветвленную сеть с электронно-плотными «зернами». Динамическое рассеяние света продемонстрировало, что одиночные пики, соответствующие комплексам TMV-N-lys/DHFR-M2e, были значительно смещены относительно контрольных вирионов TMV-N-lys. Косвенный иммуноферментный анализ с использованием TMV- и М2е-специфических антител показал, что комплексы сохраняют стабильность при длительной адсорбции. Полученные результаты позволяют использовать данные биокомплексы для совершенствования кандидатных универсальных вакцин против вируса гриппа.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2020
Объем: 12с.
Дополнительная информация: 2020.-N 2.-С.260-271. Библ. 32 назв.
Просмотров: 34