ГЛУТАМАТ-РАЦЕМАЗА НЕОБХОДИМА ДЛЯ ВЫЖИВАЕМОСТИ КЛЕТОК Streptococcus iniae И ЦЕЛОСТНОСТИ ИХ КЛЕТОЧНОЙ СТЕНКИ

Аннотация:

Streptococcus iniae является патогенным и зоонозным видом бактерий, который вызывает возникновение болезней у человека и гибель многих видов рыб. Как было недавно показано у бактерий наблюдается тенденция развития устойчивости к антибиотикам, что гарантирует интерес к этой теме и требует поиска новых подходов для борьбы с возникающей инфекцией. Глутамат-рацемаза (Murl) является широко распространенным ферментом, участвующим в процессе синтеза пептидогликанов, который играет значительную роль в поддержании целостности клеточной стенки. Однако необходимость в активной глутамат-рацемазе является видоспецифичной. В настоящей работе нами был произведен нокаут гена, кодирующего глутамат-рацемазу в клетках S. iniae, и определена ее роль в поддержании целостности клеточной стенки. Кроме того, нами было осуществлено клонирование и экспрессия гена MurI, выделен и очищен его белковый продукт и определены его биохимические характеристики. Проведенный биохимический анализ показал, что ген MurI из S. iniae кодирует функционально активный фермент с молекулярной массой 30 кДа и оптимальными значениями температуры (35°С) и рН (8,5). Ионы металлов, такие как Сu2+, Мn2+, Со2+ и Zn2+, были способны ингибировать его активность. Ген MurI крайне необходим для обеспечения жизнеспособности клеток S. iniae и целостности их клеточной стенки. Оказалось, что для достижения оптимального роста мутантного штамма S. iniae необходимо обеспечить высокую концентрацию D-глутамата. Анализ проницаемости мембран клеток мутантного штамма показал увеличение повреждения клеточной стенки во время D-глутаматного голодания. Кроме того, мутантный штамм потерял свою вирулентность при инкубации в крови рыб. Наши результаты показали, что нокаут гена МиrI приводит к появлению ауксотрофного штамма S. iniae с поврежденной клеточной стенкой.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2020
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2020.-N 2.-С.287-296. Библ. 38 назв.
Просмотров: 27