IN VITRO И IN VIVO ОЦЕНКА РАДИОХИМИЧЕСКОГО СОЕДИНЕНИЯ НА ОСНОВЕ МЕЧЕННОГО 99mТс КАРКАСНОГО БЕЛКА DARPin9-29 ДЛЯ МОЛЕКУЛЯРНОЙ ВИЗУАЛИЗАЦИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОБРАЗОВАНИЙ С ГИПЕРЭКСПРЕССИЕЙ Her2/neu

Аннотация:

Для обеспечения направленной доставки радионуклидов при диагностике злокачественных новообразований активно используют молекулы, связывающиеся со специфическим «таргетным» антигеном. В последние годы исследуется возможность применения для этих целей адресных молекулярных структур DARPin (Design Ankyrin Repeat Protein). Одной из наиболее изучаемых молекулярных мишеней по-прежнему остается рецептор эпидермального роста Her2/neu, гиперэкспрессия которого определяется на поверхности опухолевых клеток. Цель: Изучение эффективности радиохимического соединения на основе меченных 99тТс адресных молекул DARPin9-29 для радионуклидной диагностики злокачественных опухолей с гиперэкспрессией Her2/neu. Материал и методы: Последовательность DARPin9-29 была амплифицирована с плазмиды pET-DARP-6HIS для экспрессии гена DARPin9-29-His6 в клетках Е. coli. Элюат 99mTcO4-(400-500 мкл, 4 ГБк) был добавлен в набор для приготовления трикарбонила технеция [99mTc(H2О)3(CО)3]+ (CRS Kit, Швейцария) с последующей инкубацией при температуре 100°С в течение 20 мин. После инкубации 40 мкл [99mTc(H20)3(C0)3]+ было добавлено к 168 мкг DARPin9-29 в 100 мкл PBS (натрий-фосфатный буфер) с последующей инкубацией при температуре 40°С в течение 60 мин. Радиохимические выход и чистота определялись с помощью тонкослойной радиохроматографии (ТСРХ), очищение проводилось с использованием очищающих колонок NAP-5 (GE Healthcare, Швеция). Для изучения специфичности исследуемого радиофармацевтического соединения использовались клеточные линии с различным уровнем экспрессии Her2/neu: SKOV-3 > ВТ474 » DU-145. Для проведения in vitro исследования использовалась экспрессирующая Her2/neu клеточная линия SKOV-3. Исследование проводилось через 6 ч после введения препарата. Результаты: Радиохимический выход составил 72±8%, радиохимическая чистота после очищения - 98,7±1,0%. Показатели стабильности в растворе PBS через 1 ч составили 99,8±0,2; через 3 ч - 98,2±0,1. Данные in vitro исследований продемонстрировали, что накопление изучаемого соединения прямо пропорционально уровню экспрессии Her2/neu клеток, при этом при блокировании рецепторов избытком немеченого протеина отмечается значительное снижение связывания в группе клеток. Данные по биораспределению и ОФЭКТ/КТ в организме животного BALB/c nu/nu через 6 ч после введения радиофармпрепарата продемонстрировали быстрое выведение соединения из кровотока и высокую аккумуляцию в опухоли, печени, почках и мочевом пузыре. Заключение: Проведенные исследования продемонстрировали высокие показатели радиохимического выхода и чистоты, а также стабильность изучаемого соединения. Результаты in vitro и in vivo анализа показали специфичность и аффинность радиофармпрепарата к рецептору Her2/neu на поверхности опухолевых клеток. Выявленная при in vivo исследованиях высокая аккумуляция препарата в печени и почках, вероятно, обусловлена липофильностью 99mТс(СО)3-, связанной с гексагистидиновым концом, и свидетельствует об ограничении его дальнейшего клинического использования в оценке состояния указанных выше органов, что потребует дополнительных методов диагностики, а также возможной модификации химической структуры.

Авторы:

Издание: Медицинская радиология и радиационная безопасность
Год издания: 2020
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2020.-N 1.-С.37-41. Библ. 18 назв.
Просмотров: 26