Коамплификация участков генома Mycobacterium leprae методом ПЦР в реальном времени: обнаружение возбудителя и возможность полуколичественной оценки бактериальной нагрузки

Аннотация:

Цель исследования: Разработка метода коамплификации однокопийных генов и повторяющихся элементов генома Mycobacterium leprae при анализе клинического материала от больных лепрой с оценкой клинической значимости результатов подобного исследования. Материалы и методы. Материалом для исследования явились образцы скарификатов и биоптатов кожи от больной Р. с диагнозом «А30.5 Лепра. Мультибациллярная форма. Лепроматозный тип. Активная стадия». Поиск ДНК М. leprae в клиническом материале проводили методом ПЦР в реальном времени (РТ-ПЦР) с использованием праймеров и гидролизуемых зондов к однокопийным видоспецифичным генам гроВ (кодирует В-субъединицу бактериальной РНК-полимеразы), sodA (кодирует фермент супероксиддисмутазу) и mntH (кодирует белок марганцевый транспортер), а также некодирующему многокопийному элементу генома — RLEP. Результаты. С использованием различных вариантов РТ-ПЦР получен согласующийся результат о присутствии или отсутствии ДНК М. leprae в отдельных исследованных клинических образцах. Подтверждена высокая чувствительность ПЦР-детекции многокопийного элемента генома RLEP в сравнении с однокопийными генами гроВ, sodA и mntH, заключающаяся в уменьшении количества циклов амплификации (Ct), необходимых для превышения порогового уровня флуоресценции гидролизующихся зондов, и приводящая к максимальной интенсивности сигнала флуоресценции. При построении стандартных графиков калибровки накопления флуоресцентного сигнала к одновременно анализируемым участкам генома М. leprae в разведениях от 1 до 1000 продемонстрированы четкие различия результатов коамплификации в зависимости от количественного присутствия детектируемой ДНК. Выводы. Коамплификация участков генома М.leprae с разной степенью копийности методом РТ-ПЦР обеспечивает эффективную детекцию ДНК возбудителя лепры в клиническом материале и формирует основу для полуколичественной оценки бактериальной нагрузки в кожных биоптатах и скарификатах.

Авторы:

Издание: Вестник дерматологии и венерологии
Год издания: 2019
Объем: 7с.
Дополнительная информация: 2019.-N 6.-С.22-28. Библ. 18 назв.
Просмотров: 16