Оптимизированный метод получения рекомбинантных аденовирусных плазмид без использования электропорации

Аннотация:

Рекомбинантные аденовирусы широко используются для доставки и экспрессии трансгенов как для терапевтических целей, так и в фундаментальных исследованиях. Система аденовирусных векторов AdEasy™ позволяет быстро и эффективно создавать рекомбинантные репликативно-дефицитные аденовирусы. Получение рекомбинантной аденовирусной плазмиды за счет гомологичной рекомбинации в клетках Е. coli BJ5183 между шаттл-вектором, кодирующим трансген, и плазмидой pAdEasy-1, несушей большую часть генома аденовируса человека серотипа 5 (Ad5), является одним из важнейших этапов при создании рекомбинантных аденовирусов. Во многих опубликованных протоколах указывается на необходимость трансформации шаттл-вектора и плазмиды pAdEasy-1 в клетки Е. coli путем электропорации, что требует наличия соответствующего оборудования и расходных материалов. В данной работе нами был предложен оптимизированный протокол получения рекомбинантных аденовирусных плазмид с использованием только химически компетентных клеток Е. coli, без применения электропорации. Показана эффективная трансформация неочищенного линеаризованного шаттл-вектора в химически компетентные клетки штамма Е. coli BJ5183-pAdEasy-1, позволяющая идентифицировать клоны с корректными рекомбинантными аденовирусными плазмидами. С использованием оптимизированного протокола были получены четыре функциональных репликативно-дефицитных аденовируса, экспрессирующих целевые белки в клетках НЕК293. Предложенный протокол позволяет существенно упростить и удешевить методологию получения рекомбинантных аденовирусов, так как отпадает необходимость использования оборудования и расходных материалов для электропорации.

Авторы:

Издание: Молекулярная генетика ,микробиология и вирусология
Год издания: 2019
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2019.-N 4.-С.186-191. Библ. 10 назв.
Просмотров: 24