ВЛИЯНИЕ СТРУКТУРНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ В ЗОНЕ КОНТАКТА СУБЪЕДИНИЦ НА АКТИВНОСТЬ И АЛЛОСТЕРИЧЕСКУЮ РЕГУЛЯЦИЮ ПИРОФОСФАТАЗЫ ИЗ Mycobacterium tuberculosis

Аннотация:

Гексамерная неорганическая пирофосфатаза из Mycobacterium tuberculosis (Mt-РРаза) имеет ряд структурных и функциональных особенностей, выделяющих ее среди гомологов, широко распространенных в живом мире. В частности, в ней иные контактные зоны субъединиц и отсутствует N-концевой участок полипептидной цепи. В данной работе мы сконструировали две мутантные формы фермента (Ec-Mt-РРазу и R14Q-MtРРазу), в первой из которых недостающая часть цепи достроена фрагментом РРазы Escherichia coli, а во второй произведена точечная замена в зоне контакта двух тримеров внутри гексамера. Обе модификации значительно улучшили каталитические свойства фермента и устранили его ингибирование избытком кофактора, иона магния. Обнаружена активация Mt-РРазы малыми (-10 мкМ) концентрациями АТР, фруктозо-1фосфата, L-малата и негидролизуемого анашога субстрата, метилснбисфосфоната (РСР). При концентрации 100 мкМ и выше три первых соединения выступали в роли ингибиторов. Активирующее действие РСР отсутствовало у обеих мутантных форм, а ингибирующее действие фруктозо-1-фосфата отсутствовало у ЕсMt-РРазы. Эффекты остальных модуляторов изменялись только количественно. Полученные данные свидетельствуют о наличии у Mt-РРазы аллостерических центров регуляции, которые находятся в зонах контакта субъединиц или структурно связаны с ними.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2020
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2020.-N 3.-С.378-386. Библ. 22 назв.
Просмотров: 26