ВЫБОР КЛЕТОЧНОЙ ЛИНИИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ШТАММА-ПРОДУЦЕНТА РЕКОМБИНАНТНОГО ФОЛЛИКУЛОСТИМУЛИРУЮЩЕГО ГОРМОНА ЧЕЛОВЕКА

Аннотация:

Фолликулостимулирующий гормон - это один из важнейших гормонов репродуктивной системы человека, который широко используется во вспомогательных репродуктивных технологиях. Выбор штамма-продуцента рекомбинантного фолликулостимулирующего гормона человека (рчФСГ) одна из ключевых задач биотехнологического процесса. Цель работы. Целью работы являлось получение стабильной клеточной линии, продуцирующей рчФСГ, с использованием двух различных родительских клеточных линий СНО. Материалы и методы. Для получения стабильных клонов, продуцирующих рчФСГ, были использованы две клеточные линии-СНО-К1 и CHO-DXB 11, адаптированные к культивированию в бессывороточной среде. Подсчет клеток и оценку клеточной жизнеспособности осуществляли с помощью окраски трипановым синим. Концентрацию рчфСГ определяли методом иммуноферментного анализа, подлинность белка определяли методом вестерн-блотинга. Результаты. Четыре наиболее продуктивных клона, полученные с использованием клеточной линии CHO-DXB 11, были отобраны после трех этапов скрининга - отбор пула, селекция клонов и амплификация с использованием метотрексата. Наибольшей продуктивностью в течение 6 дней культивирования обладал клон CHO-FSH 11/24 - 7,1±0,6 мг/л. Три клона были выбраны после траснфекции и отбора клонов с использованием клеточной линии СНО-К1. Клон CHO-FSH 91 обладал наибольшей продуктивностью после 6 дней культивирования - 10,8±0,9 мг/л. Молекулярные массы препаратов рчФСГ, полученных от разных клеточных линий-продуцентов, совпадали с молекулярной массой коммерческого препарата «Гонал Ф» (Merck Serono). Выводы. Продуцент, полученный с помощью клеточной линии СНО-К1, будет использован для дальнейших экспериментов.

Авторы:

Издание: Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии
Год издания: 2020
Объем: 5с.
Дополнительная информация: 2020.-N 3.-С.3-7. Библ. 8 назв.
Просмотров: 23