Применение CRISPR/Cas9-системы редактирования генома в дрожжах Yarrowia lipolytica для инактивации гена YIACL2, кодирующего АТФ-зависимую цитратлиазу

Аннотация:

Проведена инактивация гена YIACL2 в дрожжах Yarrowia lipolytica двумя способами: традиционным методом с использованием генетической конструкции с маркером, позволяющим восстанавливать прототрофность по урацилу, и без маркера, с помощью CRISPR/Cas9-системы редактирования генома. Эффективность инактивации гена YIACL2 традиционным методом составила 4% (1 штамм AYlacl2 из 24 проверенных трансформантов), тогда как эффективность инактивации гена YIACL2 с помощью CRISPR/Cas9-системы была 75% (18 штаммов/\Ylacl2 из 24 проверенных трансформантов). Штаммы с инактивированным геном YIACL2 не способны утилизировать цитрат в качестве единственного источника углерода. Была изучена кинетика роста штамма AYlacl2 на среде с глюкозой и ацетатом в качестве единственных источников углерода. Тот факт, что AYlacl2 способен расти на минимальной среде с глюкозой, свидетельствует либо о наличии дополнительного пути транспорта ацетильной группы из митохондрии, либо о возможности синтеза ацетил-КоА в обход пируватдегидрогеназного комплекса в дрожжах Y. lipolytica.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2020
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2020.-N 1.-С.16-24. Библ. 29 назв.
Просмотров: 28