ВЛИЯНИЕ ПОЛОЖЕНИЯ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ HIS6 НА ЭКСПРЕССИЮ И СВОЙСТВА ФЕНИЛАЦЕТОНМОНООКСИГЕНАЗЫ ИЗ Thermobifida fusca

Аннотация:

Фенилацетонмонооксигеназа (КФ 1.14.13.92, РАМО) — фермент, катализирующий реакцию окисления кетонов до сложных эфиров с использованием молекулярного кислорода и NADPH. РАМО является перспективным ферментом для использования в биотехнологических процессах. Нами получены генетические конструкции с геном РАМО из Thermobifida fusca, в который были дополнительно введены нуклеотиды, кодирующие последовательность His6 (His-tag) как на N-, так и на С-конце фермента (РАМО N и РАМО С соответственно). Также была получена описанная ранее РАМО L с His-tag, отделенным от С-конца дополнительным линкером KLGPEQKLISEEDLNSAVD. Все варианты РАМО экспрессировались в клетках Escherichia coli BL21(DE3) в активной форме, однако в случае РАМО N уровень экспрессии по сравнению с таковым для двух остальных форм был в 3—5 раз выше. Каталитические константы kсat РАМО С и РАМО L совпадают с литературными данными для РАМО L, полученной в другой системе экспрессии. В случае РАМО N наблюдается небольшое (на 15%) уменьшение kсat. Константы Михаэлиса по NADPH для всех форм РАМО в пределах погрешности совпадают с литературными данными для РАМО L, а Км по бензил-ацетону была выше в несколько раз. Кинетика термоинактивации и дифференциальная сканирующая калориметрия показали большую (в 3—4 раза) температурную стабильность РАМО N по сравнению с вариантами фермента с His-tag на С-конце.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2020
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2020.-N 5.-С.672-681. Библ. 18 назв.
Просмотров: 22