ВЫСОКОАКТИВНАЯ РЕКОМБИНАНТНАЯ ФОРМИАТДЕГИДРОГЕНАЗА ПАТОГЕННЫХ БАКТЕРИЙ Staphylococcus aureus: ПОЛУЧЕНИЕ И КРИСТАЛЛИЗАЦИЯ

Аннотация:

NAD+- зависимая формиатдегидрогеназа бактерий Staphylococcus aureus (SauFDH) является одним из ключевых ферментов, отвечающих за выживание этого патогена в условиях биопленок. Высокоселективные ингибиторы SauFDH могут быть использованы в качестве антибактериального препарата именно против биопленок S. aureus. Наиболее перспективным путем является поиск таких ингибиторов на основе трехмерной структуры фермента. Проведено культивирование штамма Е. coli — суперпродуцента рекомбинантной SauFDH с выходом 1 г целевого белка с литра среды. Разработана и оптимизирована процедура выделения и очистки, позволившая получить 400 мг гомогенного фермента с выходом 61%. Показано, что SauFDH имеет самую высокую удельную активность 20 ед. на мг белка, что в два раза выше по сравнению с таковой для всех описанных формиатдегидрогеназ. Проведено два цикла поиска и оптимизации условий кристаллизации. В результате для апо- и холо-форм SauFDH получены кристаллы размером 200 и 40 мкм соответственно. Проведен сбор наборов дифракционных данных, определены пространственные группы и параметры элементарных ячеек. Кристаллы апо- и холо-форм SauFDH, которые дифрагировали до разрешения 2,2 и 2,7 А соответственно, принадлежали к разным пространственным группам, что может свидетельствовать о связывании кофактора в случае холоформы фермента.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2020
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2020.-N 6.-С.807-816. Библ. 25 назв.
Просмотров: 22