ВЛИЯНИЕ ЗАМЕН ОСТАТКА ЦИСТЕИНА В СОСТАВЕ МОТИВА GCSAG АКТИВНОГО ЦЕНТРА НА СВОЙСТВА ЭСТЕРАЗЫ PMGL2

Аннотация:

Эстераза PMGL2, ген которой был обнаружен в результате скрининга метагеномной библиотеки ДНК из вечномерзлого грунта, относится к семейству HSL (гормон-чувствительной липазы млекопитающих). Аминокислотная последовательность PMGL2 характеризуется наличием не описанного ранее варианта консервативного мотива активного центра GXSXG, включающего остаток Cysl73 рядом с каталитическим остатком Serl74. С целью выяснения функциональной роли данного остатка цистеина сконструирован ряд мутантных вариантов PMGL2, содержащих в этом положении остатки треонина, аспарагиновой кислоты или серина, и определены их свойства. Удельная активность мутанта C173D по отношению к n-нитрофенилбутирату на 60% выше, чем для фермента дикого типа (wtPMGL2), в то время как вариант C173T/C202S продемонстрировал пониженную активность. По отношению к n-нитрофенилоктаноату, вариант С173D активнее wtPMGL2 на 15%, тогда как замены C173T/C202S понизили активность на 17%. Для мутанта C173D также характерна высокая активность в области пониженных температур (20—35°С) при существенной потере термостабильности. Значение Kсаt для данного белка на 56% выше, чем для исходного фермента, тогда как для варианта C173S, который обнаружил наиболее высокую термостабильность среди исследованных мутантов, она такая же как для фермента дикого типа. Полученные результаты демонстрируют, что замены аминокислотных остатков, соседних с каталитическим остатком серина в составе мотива GXSXG, оказывают существенное влияние на свойства эстеразы PMGL2.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2020
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2020.-N 6.-С.831-839. Библ. 32 назв.
Просмотров: 23