ИДЕНТИФИКАЦИЯ ГЕНА ХИМОЗИНА АЛТАЙСКОГО МАРАЛА [Cervus Elaphus Sibiricus (Severtzov, 1873)], НАРАБОТКА ЕГО РЕКОМБИНАНТНОГО АНАЛОГА В ПРОКАРИОТИЧЕСКОЙ СИСТЕМЕ ЭКСПРЕССИИ И АНАЛИЗ НЕКОТОРЫХ БИОХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПОЛУЧЕННОГО ФЕРМЕНТА

Аннотация:

Впервые идентифицирован ген химозина (СYМ) алтайского марала (далее — марала). С помощью сравнительного анализа нуклеотидной последовательности установлена его экзон/интронная организация и реконструирована последовательность мРНК СYМ, кодирующая препрохимозин марала. На основе нуклеотидной последовательности мРНК СYМ марала разработан экспрессионный вектор, обеспечивающий наработку рекомбинантного фермента. Рекомбинантный прохимозин (рПроХн) марала получен в системе экспрессии Escherichia coli (штамм BL21(DE3)). Общая молокосвертывающая активность (МА) рекомбинантного химозина марала (рХн Сег) составила 2330 УЕ/мл, удельная активность равнялась 52 955 УЕ/мг. В диапазоне температур 30—50°С рХн Сег проявлял 100—81% МА, порог термостабильности составил 50°С, при 70 С фермент полностью инактивировался. В качестве образцов сравнения использовали препараты рекомбинантного химозина одногорбого верблюда (рХн Cam) и рекомбинантного химозина коровы (рХн Bos). Константа Михаэлиса (Кm), число оборотов фермента (cat) и каталитическая эффективность (kcat/ Кm) для рХн Сег составили 1,18±0,1 мкМ, 2,68±0,08 с-1 и 2,27±0,10 мкМ-1,с-1 соответственно.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2020
Объем: 13с.
Дополнительная информация: 2020.-N 7.-С.916-928. Библ. 41 назв.
Просмотров: 25