ОТВЕТ КЛЕТОК РЕТИНАЛЬНОГО ПИГМЕНТНОГО ЭПИТЕЛИЯ ЧЕЛОВЕКА НА ВОЗДЕЙСТВИЕ КОНДИЦИОНИРОВАННЫХ СРЕД РЕГЕНЕРАТОВ СЕТЧАТОК ТРИТОНА

Аннотация:

Основываясь на консервативности развития сетчатки в ряду позвоночных и сигнальных путей, участвующих в этом процессе, была выдвинута гипотеза, что активные факторы, стимулирующие регенерацию сетчатки тритонов, способны вызывать трансдифференцировку клеток РПЭ человека. Для этого изучали действие кондиционированных сред (КС), полученных от регенерирующих in vitro сетчаток тритонов, на фенотип, экспрессию ряда генов и локализацию белков клеток ретинального пигментного эпителия человека (РПЭ) линии ARPE-19. В течение 120 ч культивирования наблюдали изменение морфологии клеток РПЭ человека, проявляющееся в изменении формы и увеличении размера клеток, которые сопровождались снижением пролиферативной активности. Через 24 ч после воздействия КС в клетках ARPE-19 наблюдали краткосрочное повышение экспрессии гена TUBB3 (паннейронального маркера) и снижение экспрессии генов белков-ингибиторов нейральной дифференцировки ВМР2 и ВМР4. Иммуноцитохимическим (ИЦХ) методом на сроке 24—72 ч выявлено увеличение интенсивности окрашивания клеток антителами против белка BIII-тубулина при снижении окрашивания на белок щелевых контактов Сх43 по сравнению с контролем. Одновременно снижались уровни экспрессии мРНК генов РПЭ-маркеров ОТХ2 и KRT18, а также гена KLF4, отвечающего за пролиферацию и дифференцировку. В то же время с помощью ИЦХ отмечено перераспределение локализации В-катенина из цитоплазматической мембраны в цитозоль. Для исключения мезенхимной, в частности остеогенной дифференцировки под влиянием КС, исследовали экспрессию генов SPP1, RUNX2 (с помощью кПЦР) и показали отсутствие транскрипции SPP1 в клетках ARPE-19 в контроле и под воздействием КС, а также снижение уровня экспрессии мРНК RUNX2 под воздействием КС. Таким образом, через 24—72 ч после воздействия КС регенератов сетчаток тритона в клетках ARPE-19 наблюдается попытка выхода в нейрональную дифференцировку, о чем говорит увеличение транскрипции и трансляции BIII-тубулина, ослабление межклеточной адгезии и снижение экспрессии генов ингибиторов нейральной дифференцировки ВМР2 и ВМР4, а также генов РПЭ-маркеров ОТХ2 и KRT18. Однако затем, ввиду краткосрочного воздействия КС, во временном промежутке 72—120 ч наблюдается возврат клеток к исходной дифференцировке, о чем свидетельствует снижение экспрессии генов маркеров нейрональной дифференцировки (NES, TUBB3, РАХ6) и увеличение экспрессии генов маркеров РПЭ (ОТХ2, MITF).

Авторы:

Издание: Цитология
Год издания: 2020
Объем: 16с.
Дополнительная информация: 2020.-N 9.-С.638-653. Библ. 0 назв.
Просмотров: 13