ЦИСТЕИНОВАЯ ПРОТЕАЗА ИЗ СЕМЯН ЛЬНА ОБЛАДАЕТ СИЛЬНЫМ АНТИКОАГУЛЯНТНЫМ, АНТИТРОМБОЦИТАРНЫМ ДЕЙСТВИЕМ И СПОСОБНА РАСТВОРЯТЬ ТРОМБЫ

Аннотация:

В настоящем исследовании была выделена, очищена и охарактеризована цистеиновая протеаза из семян льна (FSCP — flax seed cysteine protease), которая обладает выраженными антикоагулянтными и антитромбоцитарными свойствами и способна растворять образовавшиеся сгустки крови. Эта протеаза была очищена до гомогенного состояния с использованием комбинации методов гельфильтрации и ионообменной хроматографии. Чистота полученного препарата была подтверждена методами SDS-PAGE, RP-HPLC и MALDI-TOF. Согласно результатам SDS-PAGE в восстанавливающих условиях и в отсутствие восстановителей, в препарате FSCP присутствовала одна чётко выраженная белковая полоса с молекулярной массой ~160 кДа. Точное значение молекулярной массы FSCP, установленное с помощью метода масс-спектрометрии MALDI-TOF, оказалось равным 168 кДа. Спектры кругового дихроизма белка FSCP указывают на присутствие в структуре этого белка 25,6% спиральных структур, 25,8% структур типа «поворот» и 48% структур типа «случайный клубок» и на отсутствие бета-складчатой структуры. FSCP гидролизует как казеин, так и желатин с удельной активностью 3,5 и 4,2 ед./мгмин соответственно. Протеолитическая активность FSCP полностью отменялась при добавлении йодоуксусной кислоты, что позволяет предположить, что FSCP является представителем семейства цистеиновых протеаз. Было обнаружено, что оптимальные значения рН и температуры для протеолитической активности FSCP равны рН 6,0 и 30°С соответственно. FSCP демонстрировала сильную антикоагулянтную активность как в препаратах обогащённой тромбоцитами плазмы, так и в случае плазмы, бедной тромбоцитами, вызывая удлинение времени образования сгустков от 222 до 1100 с и от 256 до 1210 с соответственно. FSCP вызывал деградацию фибриногена человека и фибриновых сгустков. Конечные продукты деградации фибриногена в результате действия тромбина и FSCP были разными. Более того, FSCP ингибировал агрегацию отмытых тромбоцитов, индуцируемую ADP, эпинефрином, тромбином, коллагеном, арахидоновой кислотой и фактором активации тромбоцитов. Было обнаружено, что FSCP нетоксичное соединение, так как не повреждает мембрану эритроцитов и не вызывает кровоизлияния и отеков у экспериментальных мышей.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2020
Объем: 16с.
Дополнительная информация: 2020.-N 9.-С.1305-1320. Библ. 50 назв.
Просмотров: 26