ОПТИМИЗАЦИЯ МЕТОДА ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ХИМОЗИНА В МЕТИЛОТРОФНЫХ ДРОЖЖАХ Komagataella phaffii

Аннотация:

Химозин (КФ 3.4.23.4) - аспартатная эндопептидаза обладает специфической протеолитической активностью в отношении пептидной связи Phe105-Met106. Результатом проявления протеолитической активности химозина является формирование молочного сгустка, что чрезвычайно важно при изготовлении продукции в сыроделии и пищевой промышленности. Штаммы-продуценты на основе Aspergillus niger и Kluyveromyces lactis активно используются в современной промышленности для продукции рекомбинантного химозина. Создание эффективных штаммов-продуцентов ферментов на основе Komagataella phaffii (ранее — Pichia pastoris) является важной прикладной задачей промышленной биотехнологии. Ранее была оптимизирована нуклеотидная последовательность для экспрессии в К. phaffii, получены клоны штамм-продуцентов, разработаны методы культивирования при использовании технического глицерина. Однако, достигнутые уровни продуктивности штамм-продуцентов не соответствуют достигнутым уровням в промышленных штаммах-продуцентах A. niger и К lactis. Существующие методы позволяют оптимизировать штаммы-продуценты К. phaffii как в результате оптимизациия метаболома с увеличением выхода промежуточных интермедиатов и конечных метаболитов; улучшения механизма геномных интеграций, позволяющих увеличить эффективность встраивания экспрессионных кассет; оптимизации мультикопийных инсерций методами генетической инженерии; геномного редактирования методами CRISPR/Cas9; коэкспрессии генов для улучшения внутриклеточного транспорта и секреции, а также коэкспрессии шаперонов для улучшения белкового фолдинга. Цель работы — получение высокоэффективного штамма-продуцента химозина в К. phaffii и разработка методов выделения и очистки для использования в промышленной биотехнологии.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2020
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2020.-N 6.-С.571-576. Библ. 13 назв.
Просмотров: 33