ИССЛЕДОВАНИЕ ПРИРОДЫ ТЕРМОСТАБИЛЬНОСТИ НУКЛЕОЗИДФОСФОРИЛАЗ ИЗ ПРОКАРИОТ

Аннотация:

На основе клеток Escherichia coli сконструирована библиотека штаммов-продуцентов рекомбинантных нуклеозидфосфорилаз (NP), их мутантных и гибридных форм из различных мезофильных и экстремофильных микроорганизмов. Показано, что субстраты стабилизируют структуру NP при воздействии температуры, при этом именно неорганический фосфат-ион является решающим в этом процессе. С использованием биоинформатических методов анализа сделано предположение, что N-концевая структура белков во многом определяет термостабильность NP. Сконструирован гибридный белок тимидинфосфорилазы (ТРР) из Е. coli, в котором N-концевой фрагмент (1-62 а. о.) заменен на соответствующий фрагмент ТРР из термофильной бактерии Geobacillus stearothermophilus, показано, что термостабильность полученной гибридной формы ТРР повысилась. В первичной структуре уридинфосфорилазы (UDP) из Е. coli выявлена высококонсервативная аминокислотная последовательность 25-Pro-Gly-Asp-Pro-30 для этих ферментов из мезофильных микроорганизмов. Сконструирована мутантная форма (Asp27Gly) UDP из Е. coli, которая также характеризовалась повышенной термостабильностью по сравнению с исходной формой. Сделано предположение, что именно архитектура строения фосфат-связывающего сайта у UDP и особенности его функционирования, имеют решающее значение в придании этому ферменту термостабильности.

Авторы:

Издание: Прикладная биохимия и микробиология
Год издания: 2020
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2020.-N 6.-С.577-586. Библ. 41 назв.
Просмотров: 20