Биосенсоры для исследования активности промоторов и шаперонов в клетках Bacillus subtilis

Аннотация:

Сконструированы плазмиды для определения активности промоторов в клетках Bacillus subtilis. Плазмиды содержат разные по активности конститутивные (PfbaA, PymdA_mut3, PymdA) и индуцируемые (PxylA, PxylA-cre) промоторы, под контролем которых расположены гены, кодирующие различные по термостабильности и структуре белки-репортеры. Оценивали следующие параметры биосенсоров: амплитуду ответа, пороговую концентрацию, "минимальное время ответа и влияние катаболитной репрессии для индуцируемых промоторов. Проведено сравнение активности конститутивных промоторов. Показано, что амплитуда ответа индуцируемого промотора PxylA при концентрации 0(+)-ксилозы 1% за два часа инкубации превышает контрольный уровень более чем в 100 раз, а промотора PxylA-cre — примерно в 80 раз. Однако промотор PxylA-cre более закрыт и репрессируется глюкозой. Сконструированные lux-биосенсоры, содержащие в качестве белков-репортеров бактериальные люциферазы, использованы для определения влияния молекулярных шаперонов ШаЮЕ и Триггер Фактора (ТФ) на уровень синтеза активных форм ферментов. Показано, что при отсутствии в бактериях В. subtilis шаперонов DnaKJE и ТФ синтез нативной термочувствительной люциферазы Photobacterium leiognathi значительно снижается, в то время как при отсутствии в клетках шаперона ТФ синтез нативной термостабильной люциферазы Photorhabdus luminescens повышается примерно в два раза. В условиях ошибочной трансляции под действием стрептомицина и при отсутствии шаперонов DnaKJE и ТФ синтез активных форм обеих люцифераз значительно снижен.

Авторы:

Издание: Биотехнология
Год издания: 2020
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2020.-N 6.-С.68-77. Библ. 0 назв.
Просмотров: 24