Разработка и испытание полимеразной цепной реакции в режиме реального времени для идентификации и количественного определения респираторно-синцитиального вируса крупного рогатого скота

Аннотация:

Введение. Респираторно-синцитиальный вирус крупного рогатого скота (РСВ КРС), по международной классификации Bovine orthopneumovirus, является одним из важнейших этиологических агентов респираторных болезней телят. В настоящее время необходимы быстрые и надежные методы выявления и оценки концентрации этого возбудителя. Цели и задачи — разработка полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени для выявления и количественной оценки РНК РСВ КРС и с ее помощью изучение количества вирусного генома в органах респираторного тракта у больных животных во время вспышек болезни. Материал и методы. Мишенью для амплификации служил ген протеина нуклеокапсида (N) вируса. мРНК гена GAPDH КРС была выбрана в качестве референсного гена. Для расчета количества вируса и гена CAPDH использовали панель положительных контрольных образцов с известной концентрацией. Количественную оценку концентрации вирусной РНК в пробах биоматериала проводили относительно уровня мРНК гена CAPDH крупного рогатого скота. Результаты. Аналитическая чувствительность ПЦР составила 1 -103 геномных эквивалентов в 1 см3 с высокой специфичностью и воспроизводимостью. Исследовали 273 пробы биологического материала от животных с респираторной патологией. Геном вируса выявили в 19,4% проб. РНК вируса чаше выявляли в легких — 10,61 % положительных проб, реже — в слизистой оболочке трахеи и бронхов, а также в легочных лимфатических узлах — по 0,73% положительных проб. Концентрация вируса в пробах биоматериала была различной. Максимальные концентрации генома вируса определяли в легких (1,3±0,5—4,8±0,47 log10 копий РНК BRSV/CAPDH). Заключение. Разработанный набор может быть использован для количественного определения концентрации респиратор-но-синцитиального вируса крупного рогатого скота при изучении патогенеза болезни, эффективности вакцин или противовирусных препаратов для животных.

Авторы:

Издание: Молекулярная генетика ,микробиология и вирусология
Год издания: 2020
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2020.-N 3.-С.145-150. Библ. 30 назв.
Просмотров: 15