О ВЗАИМОСВЯЗИ АУТОФАГИИ И АПОПТОЗА В ГИБЕЛИ КЛЕТОК КАРЦИНОМЫ ЛЕГКОГО А549, ИНДУЦИРОВАННОЙ CD437

Аннотация:

Синтетический ретиноид CD437, агонист у-рецептора ретиноевой кислоты (RARy), не только останавливает клеточный цикл, но и, в отличие от ретиноевой кислоты, индуцирует в опухолевых клетках RARy-независимый апоптоз посредством уникального механизма, не зависящего от пути, опосредованного рецепторами ретиноевой кислоты. Цель исследования — изучение взаимосвязи между апоптозом и аутофагией в СD437-индуцированной гибели клетки. Материалы и методы. В работе были использованы: 2D-культивирование клеток карциномы легкого А549, иммуноцитохимия, проточная цитофлуориметрия, флуоресцентная микроскопия. Результаты. CD437e диапазоне концентраций от 0,2 до 5,0 мк М увеличивал количество PI-положительных клеток в культуре карциномы легкого А549. При концентрациях, близких к ICsg, ретиноид снижал популяцию клеток в G2/М-фазе клеточного цикла и останавливал клеточный цикл в S-фазе. CD437дозозависимо увеличивал количество апоптотических клеток в присутствии нецитотоксических концентраций вортманнина, необратимого ингибитора антистрессовой киназы PI-3K, и LY294002, обратимого ингибитора. CD437 также активировал формирование аутофагосом, наблюдалось дозозависимое повышение интенсивности флуоресценции монодансилкадаверина, маркера аутофагии. Однако избирательного накопления LC-3B с возрастанием концентрации CD437(0,1—5,0 мкМ) в клетках не наблюдалось, что позволяет сделать предположение об ингибировании слияния аутофагических вакуолей и лизосом. zVAD-fmk, необратимый ингибитор каспаз, не восстанавливал аутофагию в клетках А549, и уровень LC-3B существенно не менялся при увеличении концентрации CD437, что указывало на участие CD437 в слиянии аутофагосомы с лизосомой. При инкубировании клеток с нецитотоксическими концентрациями хлорокина, ингибитора терминальной стадии аутофагии, при концентрациях CD437, близких к IС50, живых клеток практически не оставалось. Аддитивный эффект CD437 и хлорокина в индукции гибели клеток А549 предполагает, что СD437участвует в слиянии аутофагосом и лизосом, необходимом для завершения катаболизма аутофагического материала. Заключение. Полученные нами данные указывают на отмену CD437цитопротекторной функции аутофагии и запуск апоптоза, что позволяет поднять вопрос о комбинированной терапии CD437с цитотоксическими препаратами влечении карциномы легкого.

Авторы:

Издание: Российский биотерапевтический журнал
Год издания: 2020
Объем: 9с.
Дополнительная информация: 2020.-N 4.-С.65-73. Библ. 26 назв.
Просмотров: 25