ИСПОЛЬЗОВАНИЕ КОНЪЮГИРОВАННОГО С ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ МЕТКОЙ АПТАМЕРА ARC1779 ДЛЯ ОЦЕНКИ ВЛИЯНИЯ Н2О2 НА ЭКЗОЦИТОЗ ФАКТОРА ВИЛЛЕБРАНДА

Аннотация:

Предложен новый подход для количественного определения экспонированного на поверхности эндотелиальных клеток (ЭК) фактора Виллебранда (ФВ) с использованием аптамера ARC1779, взаимодействующего с доменом А1 в структуре ФВ. Для визуализации образующегося комплекса ФВ с аптамером к молекуле последнего была присоединена флуоресцентная метка Су5. Культивируемые ЭК из пупочной вены человека прижизненно окрашивали конъюгатом ARC1779-Cy5, и снимали изображение с помощью флуоресцентного микроскопа. Анализ изображения проводили с помощью программы CellProfller. Мультимерные комплексы ФВ, секретируемые тельцами Вейбеля-Паладе, при окраске конъюгатом ARC1779-Cy5 видны под микроскопом как яркие точечные структуры округлой и неправильной формы. Число этих структур многократно увеличивается при воздействии на ЭК активаторов секреции ФВ, гистамина и тромбина. Кроме того, ARC1779-Cy5 выявляет на поверхности активированных ЭК гигантские мультимеры ФВ, развёрнутые в виде длинных нитей. Секрецию ФВ в ЭК активируют вторичные мессенджеры — сАМР и Са2+. Есть свидетельства, что пероксид водорода в ЭК также выполняет функцию вторичного мессенджера. Кроме того, в ЭК поступает экзогенный Н2О2, образующийся в лейкоцитах. Задачей работы было, используя предложенный метод, определить, какое влияние Н2О2 оказывает на экспрессию ФВ на поверхности ЭК. Показано, что пероксид водорода при концентрации 100 мкМ (ниже цитотоксической) в несколько раз увеличивает количество экспонированных на плазматической мембране точечных структур ФВ. Полученные данные свидетельствуют о роли Н2О2 в качестве посредника, активирующего экзоцитоз телец Вейбеля-Паладе и секрецию ФВ в эндотелии сосудов при воспалении и при индукции образования эндогенных активных форм кислорода в ЭК.

Авторы:

Издание: Биохимия
Год издания: 2021
Объем: 11с.
Дополнительная информация: 2021.-N 2.-С.147-157. Библ. 53 назв.
Просмотров: 29