ОПРЕДЕЛЕНИЕ И ИМУНОФЕНОТИПИРОВАНИЕ ТРОМБОЦИТАРНО-МОНОЦИТАРНЫХ КОМПЛЕКСОВ В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРОМЕТРИИ

Аннотация:

Активированные тромбоциты образуют комплексы с циркулирующими лейкоцитами посредством мембраносвязанных молекул. Взаимодействие тромбоцитов с моноцитами лежит в основе патофизиологических механизмов, связывающих процессы тромбообразования и воспаления. Определение и анализ тромбоцитарно-моноцитарных комплексов (ТМК) позволяют выявить их физиологическую и патогенетическую роль, а также имеют важное диагностическое значение при изучении различных патологических состояний, в том числе акушерских. Цель исследования состояла в разработке метода определения количественного содержания ТМК в периферической крови, позволяющего сохранить основные фенотипические характеристики тромбоцитов и моноцитов и выявить их изменения при анализе биоматериала ex vivo. Предлагаемый метод сочетает в себе немедленную фиксацию образцов крови, иммуноцитохимическое флуоресцентное окрашивание дифференцировочных и активационных маркеров тромбоцитов и моноцитов с последующим лизисом эритроцитов и анализ с помощью проточной цитофлуориметрии. Было исследовано 14 образцов периферической крови, полученных от пациенток с отягощенным акушерским анамнезом в первом триместре текущей беременности. Показано, что процедура фиксации позволяет сохранить количественные и качественные характеристики ТМК, существующие in vivo, тогда как при отсутствии фиксации наблюдается многократное увеличение количества ТМК и уровня экспрессии активационных маркеров тромбоцитов и моноцитов ex vivo. Используемая панель моноклональных антител и примененные стратегии гейтирования обеспечивают оценку относительного и абсолютного количества ТМК и их фенотипических характеристик как в общей популяции (CD45+CD14+) моноцитов, так и в субпопуляциях «классических» (CD14+CD16), «промежуточных» (CD14+CD16+) и «неклассических» (CD14lowCD16+) моноцитов. Выработанный подход позволяет оценить вклад отдельных субпопуляций моноцитов в формирование ТМК и степень их участия в физиологических и патофизиологических процессах. В отдельных образцах было выявлено увеличение количества ТМК, сопровождавшееся существенным повышением в них экспрессии активационного маркера тромбоцитов CD62P и снижением экспрессии его моноцитарного лиганда CD 162. Данные перемены могут свидетельствовать об изменении активационного статуса комплексообразующих клеток и возможном участии ТМК в патофизиологических механизмах некоторых акушерских осложнений. Иммунофенотипирование ТМК позволяет дополнительно охарактеризовать их провоспалительный, прокоагулянтный и адгезионный потенциал и может быть применено как в фундаментальных исследованиях, так и в целях диагностики. В частности, данный метод может быть использован для определения и характеристики ТМК при акушерских осложнениях, сопровождающихся воспалением и нарушениями гемостаза. Статья дана на английском языке.

Авторы:

Издание: Медицинская иммунология
Год издания: 2021
Объем: 10с.
Дополнительная информация: 2021.-N 2.-С.401-410. Библ. 19 назв.
Просмотров: 23