Дальневосточный государственный медицинский университет Поиск | Личный кабинет | Авторизация
Поиск статьи по названию
Поиск книги по названию
Каталог рубрик
в коллекциюДобавить в коллекцию

Влияние электропорации ДНК конструкциями на дендритные клетки


Аннотация:

На сегодняшний день, трансфекция клеток млекопитающих ДНК или РНК конструкциями является единственным методом доставки запрограммированной информации в ядро клетки. Одним из часто используемых методов трансфекции в работе с дендритными клетками, является электропорация. Суть метода состоит в повышении проницаемости мембраны путем проведения электрического импульса через клетку. В связи с повышенной проницаемостью мембраны повышается шанс попадания ДНК или РНК конструкций внутрь клетки, но при этом снижается выживаемость клетки после воздействия тока на плазматическую мембрану клетки. В исследовании использовали мышей самцов линии С57В1/6 возраста 2-4 месяца. Из бедренной кости мышей выделяли 20 х 106 клеток костного мозга, после клетки культивировали в полной RPMI1640 среды в течение 7 суток. Для генерации дендритных клеток из клеток костного мозга, в культуральную среду добавляли 100 нг/мл rmFlt3-L на 0 день. После 7 дней культивирования, клеточную культуру электропорировали контрольными некодирующими плазмидами р5 (ЕР Р5) или плазмидами pmaxCCR9 (ЕР CCR9), кодирующими мышиный рецептор хемотаксиса CCR9. В качестве контролей выступали, клеточные культуры электропорированные без плазмид (mock ЕР) и культуры клеток без электропорации (nоnе ЕР). Электропорировали 5 х 105 клеток и оставляли на 10 минут. После 10 минут клетки собирались и рассаживались в 24-луночном планшете в 1 мл культуральной среды и кондиционной среды (1:1). Затем добавляли по 50 нг/мл Flt3-L в каждую лунку. На следующий день трансфицированные клетки оценивались с помощью метода проточной цитофлуориметрии и количественной ПЦР. Установлено, что после электропорации в группах mock ЕР, ЕР Р5, ЕР CCR9 относительное количество живых CD 11с+ дендритных клеток было достоверно меньше, чем в nоn ЕР группе. Более того, в группах ЕР Р5 и ЕР CCR9 было достоверно меньше живых CD11с+ дендритных клеток, чем в группе mock ЕР. Экспрессия маркера CD86 было достоверно выше в группах ЕР Р5 и ЕР CCR9, чем в группах поп ЕР и mock ЕР. Экспрессия I-Аb среди cDC2s было достоверно выше в группе ЕР CCR9 по сравнению с группой поп ЕРУ плазмацитоидных дендритных клеток и конвенциональных дендритных клеток 2-го типа, в группах ЕР CCR9, экспрессия CCR9 была достоверно выше, чем в группе nоn ЕР. Таким образом, в данном исследовании продемонстрирована эффективность электропорации, сопровождающаяся снижением выживаемости и созреванием дендритных клеток.

Авторы:

Булыгин А.С.
Терещенко В.П.
Заводский Р.Ю.
Облеухова И.А.
Сенников С.В.
Силков А.Н.

Издание: Медицинская иммунология
Год издания: 2021
Объем: 6с.
Дополнительная информация: 2021.-N 4.-С.653-658. Библ. 14 назв.
Просмотров: 17

Рубрики
Ключевые слова
cd11
flt3
бедренная
болеющие
влияние
воздействие
возраст
выживаемости
генерация
групп
данных
дендритные
днк
добавки
доставка
единственная
живого
жизнеспособность
зрелость
импульсов
информации
исследование
качества
клетка
клетки
клеток
клеточная
ключ
количественная
количество
конвенциональный
кондиционные
конструкции
конструкция
контроль
контрольные
кости
костная
культи
культивирование
культур
культуральная
линии
лунка
маркер
мембран
метод
методов
минута
млекопитающие
мозга
мышей
мышиные
образ
одного
относительная
плазматическая
плазме
плазмида
планы
повышение
повышенная
полная
помощи
после
проведение
проницаемости
проточная
путем
пцр
работа
рецептор
самцов
связей
сегодня
след
слова
снижение
созревание
сравнение
среда
суток
течения
типа
ток
транс
трансфекция
хемотаксис
часы
шансы
экспрессия
электрическая
электронного
электропорация
эффективность
ядро
Ваш уровень доступа: Посетитель (IP-адрес: 44.220.255.141)
Яндекс.Метрика